一种测定三聚氰胺的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103175818103175818B(45)授权公告日2014.12.10(21)申请号201310087869.X刘保生等.曙红-中性红荧光能量转移抑制(22)申请日2013.03.19法测定肝素.《分析试验室》.2009,第28卷(第9期),(73)专利权人桂林理工大学刘金彦等.荧光光谱法测定奶制品中的三聚地址541004广西壮族自治区桂林市建干路氰胺.《分析试验室》.2010,第29卷(第9期),12号审查员朱艳(72)发明人唐宁莉李欣蒙华毅(51)Int.Cl.G01N21/64(2006.01)(56)对比文件US5955002A,1999.09.21,CN102608086A,2012.07.25,CN102608086A,2012.07.25,JP昭64-9345A,1989.01.12,CN101576543A,2009.11.11,权权利要求书1页利要求书1页说明书2页说明书2页附图1页附图1页(54)发明名称一种测定三聚氰胺的方法(57)摘要本发明公开了一种测定三聚氰胺的方法。于10mL比色管中依次加入0.05～5.0mL0.1～0.5g/L的三聚氰胺溶液、1.0～2.5mL4.0×10-6mol/L的曙红Y溶液、0.5～1.0mL2.0×10-4mol/L的中性红溶液和0.3～1.0mLpH3.5的伯瑞坦-罗比森缓冲溶液,以不加三聚氰胺的溶液为试剂空白,用超纯水定容至刻度,在30℃水浴反应30min后,于荧光光度计上,用1cm石英比色皿,以520nm为激发波长,在538nm处分别测定含三聚氰胺溶液的荧光值F538nm和试剂空白的荧光值F0,计算差值ΔF538nm=F538nm–F0值。取牛奶30mL,加入20.0mL1%的三氯乙酸溶液和8.0mL2%的乙酸铅溶液,超声20min;取部分溶液离心10min,取上清液1mL,依上述方法测定荧光值,计算牛奶中三聚氰胺的含量。本发明方法简便、快捷。CN103175818BCN103758BCN103175818B权利要求书1/1页1.一种测定三聚氰胺的方法，其特征在于具体步骤为：（1）于6支10mL比色管中依次加入0.0、0.07、1.0、2.0、3.0、5.0mL0.1～0.5g/L的三聚氰胺溶液，再在每支比色管中分别加入1.0～2.5mL4.0×10-6mol/L的曙红Y即EY溶液、0.5～1.0mL2.0×10-4mol/L的中性红即NR溶液和0.3～1.0mLpH3.5的伯瑞坦-罗比森即B-R缓冲溶液，以不加三聚氰胺的溶液为试剂空白，然后用超纯水将6支比色管定容至刻度，摇匀，在30℃的恒温水浴中反应30min后，于荧光光度计上，用1cm石英比色皿，以520nm为激发波长，在538nm处分别测定含三聚氰胺溶液的荧光值F538nm和试剂空白的荧光值F0，计算荧光值差值ΔF538nm=F538nm–F0值,其荧光值差值ΔF538nm与三聚氰胺质量浓度ρ在1.4～100mg/L范围内成线性关系，线性回归方程为：ΔF538nm=0.7736ρ+17.33，相关系数r=0.9992，检出限为1.1mg/L；（2）取牛奶30mL，加入20.0mL质量百分比浓度为1%的三氯乙酸溶液，和8.0mL质量百分比浓度为2%的乙酸铅溶液，超声20min；然后取部分溶液于离心管中，离心10min，取上清液作为待测液；（3）取步骤（2）处理后的牛奶待测液1mL，依步骤（1）的方法测定荧光值，计算出牛奶中三聚氰胺的含量。2CN103175818B说明书1/2页一种测定三聚氰胺的方法技术领域[0001]本发明涉及一种测定三聚氰胺的方法，特别是能量转移荧光光谱法测定三聚氰胺的方法。背景技术[0002]三聚氰胺是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化合物，常用作化工原料，不可用于食品加工或食品添加物。中国自2008年三鹿奶粉事件发生后，国家规定：液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的产品一律不得销售。因此研究建立一种快速、准确、成本低廉的测定牛奶中三聚氰胺含量的新方法具有重要的意义。目前，三聚氰胺的测定方法主要是高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法等。但是这些方法所用仪器昂贵，不易推广。荧光光谱法具有分析速度快、操作简便、分析精度高等优点，在实际分析中应用广泛。曙红Y-中性红作为能量转移体系，已应用于蛋白质的测定，但利用该能量转移体系采用荧光光谱法测定三聚氰胺，尚未见报道。发明内容[0003]本发明的目的是提供一种基于曙红Y-中性红能量转移的测定三聚氰胺的荧光光谱法。[0004]具体步骤为：[0005]（1）于6支10mL