一种暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103430773A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103430773103430773A(43)申请公布日2013.12.11(21)申请号201310385305.4(22)申请日2013.08.28(71)申请人云南省热带作物科学研究所地址666100云南省西双版纳傣族自治州西双版纳州景洪市宣慰大道99号(72)发明人张春霞何明霞王文兵刘静高锋曹旸伍英纪开萍王云(74)专利代理机构昆明今威专利商标代理有限公司53115代理人杨宏珍(51)Int.Cl.A01G1/04(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书2页说明书2页(54)发明名称一种暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法(57)摘要一种暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法，属于真菌技术领域。方法步骤为：a.将暗褐网柄牛肝菌子实体组织接入M1试管培养基中培养菌丝体，培养条件为30℃，暗光培养15-20d；b.分别将重量百分比为5%的海藻糖和20%的甘油保护剂装至1.8ml的冻存管中，121℃灭菌30min；c.将暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于冻存管中，每支接种3-5块，接种完放入冻存盒中；d.将冻存盒先放入-20℃冰箱12h，然后迅速放入-80℃超低温冰箱保藏。优点在于：1、能实现低温保藏，且保藏的时间更长；保存8个月的菌种仍性状优良。2、用保藏方法保存的菌种进行菇房人工栽培，子实体的成熟天数相对较短，子实体的重量相对较重。CN103430773ACN10347ACN103430773A权利要求书1/1页1.一种暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法，其特征在于该菌种保藏方法的步骤如下：a.将暗褐网柄牛肝菌子实体组织接入M1试管培养基中培养菌丝体，培养条件为30℃，暗光培养15-20d；b.分别将重量百分比为5%的海藻糖和20%的甘油保护剂装至1.8ml的冻存管中，121℃灭菌30min；c.将暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于冻存管中，每支接种3-5块，接种完放入冻存盒中；d.将冻存盒先放入-20℃冰箱12h，然后迅速放入-80℃超低温冰箱保藏。2.权利要求1所述的一种暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法，其特征在于M1培养基的组成为：葡萄糖20.0g，硫酸镁1.0g，磷酸二氢钾1.0g，酵母膏2.0g，马铃薯200.0g，琼脂20.0g，用自来水定容至1L，pH4.0～5.0。2CN103430773A说明书1/2页一种暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法技术领域[0001]本发明属于真菌技术领域，具体涉及一种暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法。背景技术[0002]暗褐网柄牛肝菌Phlebopusportentosus（Berk.&Broome）Boedijn隶属于小牛肝菌科Boletinellaceae，脉柄牛肝菌属Phlebopus。国内分布于云南、广西和海南等地（臧穆，1986，2006；杨祝良和臧穆，2003;Kai-PingJietal.2011）；国外分布于泰国、斯里兰卡、越南、印度尼西亚、巴西、墨西哥、澳大利亚和新西兰（Heinemannetal.1982；Barbara&Segedin,1987；Watling，2001；Bandalaetal.2004；Maria&Marina，2007）。其子实体个体肥大，味道鲜美，营养价值丰富，是云南南部及泰国东北部最受群众喜爱的名贵食用菌之一（纪开萍等，2007，2009；Saisamornetal.2007）。目前我们已经在温室（菇房）人工栽培和田间半人工栽培暗褐网柄牛肝菌方面取得了成功，栽培的方法和模式都初具规模。[0003]菌种是科研和生产的重要资源。菌种保藏即在人为创造的条件下，使菌种的新陈代谢活动处于不活跃状态，从而较长时间地保持菌种的生命力和原有性状。暗褐网柄牛肝菌菌种保藏是从事暗褐网柄牛肝菌栽培、菌种生产的一项重要工作。[0004]目前食用菌保藏方法主要有传代培养保藏法、液体石蜡覆盖保藏法、液氮低温保藏法、砂土管保藏法以及自然基质保藏法等。目前暗褐网柄牛肝菌生产上常用的传代培养保藏法，是将菌种置于15℃-20℃条件下保藏，每隔3-6个月转管1次。这一技术提供了一个简便有效的短期保藏方法，但也增加了菌种产生污染和形态、生理特征发生变异的风险。发明内容[0005]本发明的目的在于提供一种低温条件下暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法。[0006]为实现以上目的，本发明采取的技术方案如下：[0007]a.将暗褐网柄牛肝菌子实体组织接入M1试管培养基中培养菌丝体，培养条件为30℃，暗光培养15-20天；[0008]b.分别将重量百分比为5%的海藻糖和20%的甘油保护剂装至1.8ml的冻存管中，121℃灭菌30min；[0009]c.将暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于冻存管中，每支接种3-5块，接种完放