一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103525733103525733A(43)申请公布日2014.01.22(21)申请号201310483057.7(22)申请日2013.10.15(83)生物保藏信息CCTCCNO:M20134512013.09.26(71)申请人江南大学地址214122江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号(72)发明人陈坚汝成业张娟堵国成(74)专利代理机构北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419代理人何自刚王玉松(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)A23C7/04(2006.01)C12R1/07(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书3页说明书3页附图2页附图2页(54)发明名称一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌及其应用(57)摘要本发明公开了一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌，于2013年9月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2013451，经发酵优化产酶活力达到3500U/ml。此菌株是从土壤中筛选得到,具体通过微生物的富集，目的菌株的分离，透明圈法筛选得到，利用SDS-PAGE验证菌株具有降解过敏原的效果。该菌株能够高效降解牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白，并通过纯化最终获得纯酶液，在一定时间内可以特异性降解牛奶过敏原，为制备脱敏奶粉提供了一种新的方法，同时有效地保护了牛奶中其他的营养成分。CN103525733ACN103527ACN103525733A权利要求书1/1页1.一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌，于2013年9月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2013451，经发酵优化产酶活力达到3500U/ml。2.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌，其特征在于能有效降解牛奶过敏原αs1-酪蛋白。3.用于培养权利要求1或2所述地衣芽孢杆菌的最佳培养基为：可溶性淀粉3%（w/v），牛肉膏0.6%（w/v），KH2PO40.05%（w/v）,K2HPO4.0.05%（w/v）pH9.0。最佳培养条件：37℃下培养24h,接种量6%。4.用于培养权利要求1或2所述地衣芽孢杆菌的最佳培养条件为：37℃下培养24h，接种量6%。5.应用权利要求1所述地衣芽孢杆菌降解牛奶过敏原αs1-酪蛋白的方法，其特征在于，将所述地衣芽孢杆菌发酵上清稀释后添加到2%的脱脂牛奶中。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述地衣芽孢杆菌发酵上清稀释20倍后，以4%的比例添加到2%的脱脂牛奶中，在20min内能够特异性降解牛奶过敏原αs1-酪蛋白。7.分离权利要求1-3任一所述地衣芽孢杆菌蛋白酶的方法，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌发酵培养后利用硫酸铵沉淀、疏水柱Phenyl-FF、10KDa超滤管超滤后获得一定纯度的蛋白酶。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于专一性降解牛奶过敏原αs1-酪蛋白。2CN103525733A说明书1/3页一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌及其应用技术领域[0001]本发明涉及到一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌及其应用，特别是牛奶过敏原αs1-酪蛋白的地衣芽孢杆菌。背景技术[0002]牛奶含有丰富的营养物质，包括30多种蛋白，为酪蛋白和乳清蛋白。其中乳清蛋白主要包括α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、牛乳血清白蛋白、乳铁蛋白、免疫球蛋白等，这些蛋白都具有潜在致敏性。目前普遍认为酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白是主要过敏原。[0003]对大多数婴幼儿而言，由于生长发育初期需要补充大量的营养，牛奶就成为了营养摄入的第一选择。但是在3岁以下的儿童中牛奶过敏反应达到25%，其中酪蛋白是牛奶中存在的主要过敏原，约占牛奶总蛋白含量的80%，酪蛋白包含有αs1-(32%)，αS2-(10%)，β-(28%)和κ-酪蛋白(10%)。由于母乳中不含有αs1-酪蛋白，因而其致敏性最强。目前如何降解牛奶中的过敏原αs1-casein就成为了一个急需解决的问题。发明内容[0004]本发明要解决的技术问题是提供了一种优先降解牛奶过敏原的菌株CN1,命名为命名为地衣芽孢杆菌BacillusLicheniformisCN1，于2013年9月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2013451，保藏地址为：中国武汉、武汉大学。[0005]所述地衣芽孢杆菌能够降解牛奶过敏原αs1-酪蛋白。[0006]用于培养权利要求1所述地衣芽孢杆菌的最佳培养基：可溶性淀粉3%（w/v），牛肉膏0.6%（w/v），KH2PO40.05%（w/v）,K2HPO4.0.05%（w/v）pH9.0，最佳培养条件：37℃下培养24h,接种量6%。[0007]本发明还提