牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106198487A(43)申请公布日2016.12.07(21)申请号201610523230.5(22)申请日2016.07.05(71)申请人佳木斯大学地址154007黑龙江省佳木斯市向阳区学府街148号(72)发明人杨立滨江欣杜娟李秀玲张云杰陈永亮杨铭张秀梅(74)专利代理机构哈尔滨市文洋专利代理事务所(普通合伙)23210代理人王艳萍(51)Int.Cl.G01N21/65(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图4页(54)发明名称牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法(57)摘要牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法，本发明涉及牛奶中青霉素药物的检测方法。本发明提供一种牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法。本方法：一、制备具有SERS活性的银纳米粒子溶胶，然后利用层层自组装技术在玻璃基片上制备AgNPs组装基底；二、将待测牛奶样品用有机物/水混合溶剂处理，得到待测牛奶样品上清液；三、将组装AgNPs的玻璃基片放到待测牛奶样品上清液中浸渍，取出晾干，得到待测牛奶样品检测片；四、用拉曼光谱仪测试步骤三得到的待测牛奶样品检测片的表面增强拉曼光谱，将该光谱与青霉素药物标准品的拉曼图谱比对，实现对牛奶中青霉素药物的定性检测，定性检出限低至10-7mol/L。CN106198487ACN106198487A权利要求书1/2页1.牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、制备具有SERS活性的银纳米粒子溶胶，然后利用层层自组装技术在玻璃基片上制备AgNPs组装基底；二、向待测牛奶样品中添加有机物/水混合溶剂，超声处理2～5min，再离心分离处理10～20min，移出上清液在室温下自然蒸发至干得到残余物；再向残余物中加入去离子水并超声处理2～5min，再离心分离处理5～10min，移出上清液，依次用0.45μm和0.22μm的水系膜对上清液进行过滤，得到待测牛奶样品上清液；三、将组装AgNPs的玻璃基片放到待测牛奶样品上清液中浸渍，然后将玻璃基片取出，用去离子水冲洗并自然晾干，得到待测牛奶样品检测片；四、用拉曼光谱仪测试步骤三得到的待测牛奶样品检测片的表面增强拉曼光谱，将该光谱与青霉素药物标准品的拉曼图谱比对，实现对待测牛奶样品中青霉素药物的定性检测。2.根据权利要求1所述的牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法，其特征在于步骤一中制备具有SERS活性的银纳米粒子溶胶，然后利用层层自组装技术在玻璃基片上制备AgNPs组装基底的具体步骤如下：a、将AgNO3加入到装有去离子水的三口烧瓶中，在磁力搅拌下加热使其溶解；继续加热，当溶液升温至98～100℃的沸腾状态时加入浓度为1％的柠檬酸钠水溶液，搅拌形成透明溶胶；透明溶胶在温度为93～97℃的微沸状态下保持50～60min，然后停止加热，自然冷却至室温，得到银溶胶；其中AgNO3的质量与浓度为1％的柠檬酸钠水溶液的体积的比是9mg：1mL；b、将干净玻璃基片先放在硫酸和双氧水的混合溶液中煮沸1～2小时，然后用去离子水冲洗、N2气吹干，得到羟基化玻璃基片；再将该羟基化玻璃基片浸渍在质量浓度为0.3～1％的聚二烯丙基二甲基胺盐酸盐水溶液中保持1～2h，取出后用水冲洗干净，并用N2吹干，得到PDDA衍生化的玻璃基片；再将PDDA衍生化的玻璃基片在银溶胶中浸渍4～8h，取出用水冲洗干净，并用N2吹干，得到AgNPs组装基底。3.根据权利要求1或2所述的牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法，其特征在于步骤二中有机物/水混合溶剂是无水乙醇、氯仿与水的混合液；或者是无水乙醇、丙酮与水的混合液。4.根据权利要求3所述的牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法，其特征在于步骤二中的混合液是由无水乙醇、氯仿与水按体积比为7：2：3混合而成的。5.根据权利要求1或2所述的牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法，其特征在于步骤二中离心分离处理，离心速度为100～10000转/秒。6.根据权利要求1或2所述的牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法，其特征在于步骤三中组装AgNPs的玻璃基片放在上清液中浸渍的时间为5～11小时。7.根据权利要求1或2所述的牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法，其特征在于步骤四中拉曼光谱仪是HORIBALabRamARAMIS型，其激发光源的波长为633nm。8.根据权利要求1或2所述的牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法，其特征在于步骤四中，拉曼光谱仪采集信号的时间为3～5min。9.根据权利要求1或2所述的牛奶中青霉素药物的表面增强拉曼检测方法，其特征在于2CN106198487A权利要求书2/2页所述的青霉素为青霉素G、青霉素K或青霉素V。3CN1061