一种牛奶中抗生素残留的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106324155A(43)申请公布日2017.01.11(21)申请号201610942776.4(22)申请日2016.11.02(71)申请人百奥森（江苏）食品安全科技有限公司地址214070江苏省无锡市滴翠路100号创意园三期A幢303(72)发明人周朱晨张根义胡彬张进吴念绮(51)Int.Cl.G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种牛奶中抗生素残留的检测方法(57)摘要本发明公开了一种牛奶中抗生素残留的检测方法，在牛奶中加入破乳剂，超声分散，加入缓冲溶液进行超声提取，离心，移取上清液，进行酸化，放置，待净化，转移至固相萃取柱中进行洗脱萃取，氮气吹干，加入乙腈水溶液，混合均匀，过微孔滤膜后滤液待测；用高效液相色谱-串联质谱法，进行测定和确证，采用外标法进行定量，统计数据并判定结果。本发明检测方法处理简单，分析时间短，检测速度快，通过加入破乳剂来消除乳化现象，促使牛奶中的蛋白质、脂肪、糖类与抗生素有效分离，提高样品中抗生素的溶出率，保证最终检测结果的准确性，为食品安全提供有益保障。CN106324155ACN106324155A权利要求书1/1页1.一种牛奶中抗生素残留的检测方法，其特征在于，步骤如下：（1）量取牛奶于离心管中，加入破乳剂，超声振荡20～30min后，分散均匀后，加入磷酸盐或柠檬酸盐缓冲溶液，超声提取16～20min，离心4～6min，移取上清液，加入体积比为1:1～2的磷酸盐或柠檬酸盐缓冲溶液和盐酸进行酸化，混合均匀，放置2～3h，待净化；（2）将待净化液转移至固相萃取柱中，依次用水、甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，真空减压抽干后，用甲酸水/甲醇洗脱，收集洗脱液；在50～55℃的水浴中用氮气吹干，加入乙腈水溶液，混合均匀，保温20～30min，再次混合均匀，过孔径为0.20～0.24μm的微孔滤膜后滤液待测；（3）用高效液相色谱-串联质谱法，采用甲酸水/甲醇作为洗脱液，利用梯度洗脱的方式进行洗脱，质谱采用离子化电喷雾，进行测定和确证，采用外标法进行定量，统计数据并判定结果。2.根据权利要求1所述的牛奶中抗生素残留的检测方法，所述破乳剂为聚氧乙烯聚氧丙烯聚醚或聚氧乙烯聚氧丙烯十八醇醚。3.根据权利要求1所述的牛奶中抗生素残留的检测方法，所述固相萃取柱为C18柱或HLB萃取柱。4.根据权利要求1所述的牛奶中抗生素残留的检测方法，所述高效液相色谱-串联质谱法，洗脱梯度以体积计分别为95：5、75：25、5：95，各梯度洗脱时间分别为2.5min、3.5min、4.0min、2.5min；离子化电喷雾的离子源为HESI-II，毛细管温度为320℃，鞘气流速40L/min，辅助气流速5L/min，吹扫气流速2.5L/min，喷雾电压为3KV，透镜电压为45V，采用正离子和负离子模式分别采集数据或者正负离子同时切换采集数据，一级全扫描的分辨率R=70000，扫描范围100～1000m/z。2CN106324155A说明书1/3页一种牛奶中抗生素残留的检测方法技术领域[0001]本发明涉及食品安全检测领域，具体是一种牛奶中抗生素残留的检测方法。背景技术[0002]抗生素在乳制品中的残留越来越引起关注。除了一些常见的炎症疾病，奶牛尤其易患乳腺炎，因此兽医常采用抗生素进行治疗。由于一般抗生素能耐高温，现有的加热杀菌工艺根本无法完全消除牛奶中的抗生素残留。长期饮用含有微量抗生素的牛奶，会增加人体内细菌的耐药性，降低或完全抵消抗生素类药物的疗效，另外，对于特定人群，含有超量抗生素的牛奶还可能会引起抗生素过敏反应。因此，对牛奶进行抗生素残留检测对保证食品安全具有重要意义。[0003]目前，对牛奶中的抗生素残留检测主要有酶联免疫法、单一的高效液相色谱法、固相萃取技术、固相微萃取技术以及基质固相分散等前处理技术，以用来解决样品分析测试中的基质干扰问题。这些检测方法都涉及到样品前处理步骤，需要从牛奶中提取出抗生素。由于，牛奶中含有蛋白质、脂肪、糖类等成分，萃取时有机相与水相的界面不清，乳化状态很严重。采用常规的化学试剂并不能完全萃取出其中的抗生素成分，从而造成检测结果的准确度不高。再有，这些检测技术存在样品处理过程复杂、有毒试剂接触多、耗材消耗量大等问题，因此无法很好的检测出残留的抗生素。发明内容[0004]本发明的目的在于提供一种牛奶中抗生素残留的检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。[0005]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种牛奶中抗生素残留的检测方法，步骤如下：（1）量取牛奶于离心管中，加入破乳剂，超声振荡20～30min后，分散均匀后，加入磷酸盐或柠檬酸盐缓冲溶液，超声提取16～20min，离心