蛋白、跨膜核酸解旋纳米孔及其构建方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号CN109207454B(45)授权公告日2022.02.15(21)申请号201810062461.XC12Q1/6869(2018.01)(22)申请日2018.01.23A61K47/42(2017.01)A61K9/70(2006.01)(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN109207454A(56)对比文件StephenSchuck等.AConserved(43)申请公布日2019.01.15RegulatoryModuleattheCTerminusof(66)本国优先权数据thePapillomavirusE1HelicaseDomain201710060033.92017.01.24CNControlsE1HelicaseAssembly.《Journalof(73)专利权人广州孔确基因科技有限公司Virology》.2015,第89卷(第2期),第1129-1142地址510700广东省广州市黄埔区广州国页.际生物岛螺旋四路7号第六层602单元IanMDerrington等.Subangstromsingle-moleculemeasurementsofmotor(72)发明人耿佳孙柯逯光文魏霞蔚proteinsusingananopore.《nature应斌武biotechnology》.2015,第3卷(第10期),第1073-(74)专利代理机构成都虹桥专利事务所(普通1076页.合伙)51124佚名.E1protein[Bovine代理人梁鑫papillomavirus-1].《NCBI》.2010,NP_(51)Int.Cl.056739.1.C12N9/14(2006.01)审查员王慧C12N15/55(2006.01)权利要求书2页说明书32页G01N33/487(2006.01)序列表12页附图16页(54)发明名称蛋白、跨膜核酸解旋纳米孔及其构建方法与应用(57)摘要本发明属于生物技术领域，具体涉及一种蛋白、跨膜核酸解旋纳米孔及其构建方法与应用。本发明要解决的技术问题是克服现有的小孔径蛋白纳米孔在转运双链核酸时需要外接解旋活性组件的不足。本发明解决上述缺陷的技术方案是提供了牛乳头瘤病毒双链DNA解旋酶蛋白的截短体E1‑1(306‑577)蛋白和E1‑2(306‑605)蛋白及其变体，以及其同源蛋白的变体可以用于制备含导电通道膜，为本领域提供了一种新的有效选择。CN109207454BCN109207454B权利要求书1/2页1.以下蛋白在制备纳米孔或者含导电通道的膜中的用途，其特征在于：所述蛋白为分离的牛乳头瘤病毒双链DNA解旋酶的306‑577位氨基酸构成的蛋白，其序列为SEQIDNo.3所示。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：含有两个以上权利要求1所述的蛋白作为亚基形成的多聚体蛋白。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的构成多聚体蛋白的亚基数为4～8个。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的构成多聚体蛋白的亚基数为6个。5.根据权利要求2‑4任一项所述的用途，其特征在于：所述的多聚体蛋白为同源多聚体或异源多聚体。6.含导电通道的膜，包括：（1）膜层；和（2）分离的多聚体蛋白，所述多聚体蛋白嵌入到所述膜层以形成孔道，外加跨膜电势时可以经过所述孔道导电；所述多聚体蛋白由两个以上蛋白作为亚基形成；所述蛋白为分离的牛乳头瘤病毒双链DNA解旋酶的306‑577位氨基酸构成的蛋白，其序列为SEQIDNo.3所示。7.根据权利要求6所述的含导电通道的膜，其特征在于：其中所述膜层包括脂层或双亲高分子聚合物形成的单层或双层膜。8.根据权利要求7所述的含导电通道的膜，其特征在于：其中所述脂层包含两亲脂类。9.根据权利要求8所述的含导电通道的膜，其特征在于：其中所述脂层选自平面脂质膜层或脂质体。10.根据权利要求7所述的含导电通道的膜，其特征在于：所述的单层膜由PMOXA‑PDMS‑PMOXA形成，PMOXA表示二甲基二唑林；PDMS表示聚二甲基硅氧烷。11.根据权利要求6‑10任一项所述的含导电通道的膜，其特征在于：被施加电势时，所述含导电通道膜能够通过所述孔道易位DNA或RNA。12.根据权利要求6所述的含导电通道的膜，其特征在于：所述的构成多聚体蛋白的亚基数为4～8个。13.根据权利要求12所述的含导电通道的膜，其特征在于：所述的构成多聚体蛋白的亚基数为6个。14.根据权利要求6所述的含导电通道的膜，其特征在于：所述的多聚体蛋白为同源多聚体或异源多聚体。15.制作权利要求6‑14任一项所述含导电通道的膜的方法，其特性在于，包括以下步骤：(a)准备干的两亲脂类；以及(b)将所述干的两亲脂类重悬于溶液