一种检测奶牛乳腺炎的试剂盒及其使用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110618266A(43)申请公布日2019.12.27(21)申请号201910916156.7(22)申请日2019.09.26(71)申请人河北省科学院生物研究所地址050081河北省石家庄市桥西区友谊大街46号(72)发明人吴萌魏治静李春生陈英珠(74)专利代理机构河北东尚律师事务所13124代理人李国聪(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/58(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种检测奶牛乳腺炎的试剂盒及其使用方法(57)摘要本发明涉及一种荧光免疫层析测定试剂盒及其使用方法，属于体外诊断动物疫病产品技术领域。该试剂盒其包括塑料卡壳、检测试剂卡、样本稀释液，所述卡壳包括底壳和上盖，所述底壳内有试纸条卡槽，所述上盖设有扫描窗和样本加样孔；其中，所述检测试剂卡由在底板上依次粘贴的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成；所述扫描窗的位置与硝酸纤维素膜的位置相配合，所述样本加样孔的位置与样品垫的位置相配合。本发明试剂盒通过检测牛奶中血清淀粉样蛋白A的含量，判断奶牛是否患乳腺炎或其患乳腺炎的严重程度，具有快速、准确、成本低廉的特点。CN110618266ACN110618266A权利要求书1/1页1.一种检测奶牛乳腺炎的试剂盒，其包括塑料卡壳、检测试剂卡、样本稀释液，所述卡壳包括底壳和上盖，所述底壳内有试纸条卡槽，所述上盖设有扫描窗和样本加样孔；其特征在于，所述检测试剂卡由在底板上依次粘贴的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成；所述扫描窗的位置与硝酸纤维素膜的位置相配合，所述样本加样孔的位置与样品垫的位置相配合。2.根据权利要求1所述的检测奶牛乳腺炎的试剂盒，其特征在于，所述样品垫和结合垫均为玻璃纤维素膜，底板为聚氯乙烯(PVC)底板。3.根据权利要求2所述的检测奶牛乳腺炎的试剂盒，其特征在于，所述样品垫使用样品垫预处理缓冲液预处理，所述样品垫预处理缓冲液由样品垫缓冲剂、样品垫蛋白保护剂、样品垫表面活性剂溶于水制成；其中，所述样品垫缓冲剂选自磷酸盐(PBS)缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的任意一种，其浓度为5～100mM；所述样品垫蛋白保护剂选自BSA、鱼皮明胶、酪蛋白、酪蛋白钠盐、牛血清中的任意一种或几种的组合，其为0.5～20g/L；所述样品垫表面活性剂选自Tween-20、Tween-80、TritonX-100、TritonX-305中的任意一种，其浓度为2～20g/L；所述样品垫预处理缓冲液使用本领域的常用pH调节剂进行pH值调节，pH值的范围是7.0～8.0。4.根据权利要求2所述的检测奶牛乳腺炎的试剂盒，其特征在于，所述结合垫，其上含有荧光微球标记鸡IgY及荧光微球标记抗牛血清淀粉样蛋白A单克隆抗体的复合物。所述结合垫使用结合垫预处理缓冲液进行预处理，所述结合垫预处理缓冲液由结合垫蛋白保护剂、结合垫反应增强剂、结合垫表面活性剂溶于水制成；其中，所述结合垫蛋白保护剂选自牛血清白蛋白(BSA)、鱼皮明胶、酪蛋白、酪蛋白钠盐、牛血清、蔗糖、海藻糖中的任意一种或几种，其浓度为0.5～50g/L；所述结合垫反应增强剂选自PEG6000、PEG8000、PEG20000、PVPK30、PVPK40中的任意一种，其浓度为0.1～10g/L；所述结合垫表面活性剂选自Tween-20、Tween-80、TritonX-100、TritonX-305中的任意一种，其浓度为0.5～10g/L。5.根据权利要求2所述的检测奶牛乳腺炎的试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜，其上包被有抗牛血清淀粉样蛋白A单克隆抗体的检测线及包被有兔抗鸡IgY抗体的质控线，其中检测线靠近结合垫、质控线靠近吸水纸。6.根据权利要求3或4所述的检测奶牛乳腺炎的试剂盒，其特征在于，所述结合垫和样品垫的预处理步骤为：将结合垫或样品垫分别在结合垫预处理缓冲液或样品垫预处理缓冲液中浸泡0.5～2h，取出放于36～38℃晾干。7.权利要求1所述检测奶牛乳腺炎的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：把样本滴入样本加样孔，样本通过层析作用流入结合垫，若样本含有牛血清淀粉样蛋白A，则会与结合垫上的荧光标记牛血清淀粉样蛋白A单克隆抗体结合形成免疫复合物，该复合物及荧光标记鸡IgY继续移动至硝酸纤维素膜上，该复合物与T线包被的牛血清淀粉样蛋白A单克隆抗体特异性结合，最终形成双抗体夹心复合物，荧光标记鸡IgY与C线包被的山羊抗鸡IgY抗体结合；通过荧光定量分析仪对T线和C线的荧光值进行测量分析。根据试剂盒测出的T/C