预览加载中，请您耐心等待几秒...

中草药成药(口服液,蜜丸)的微生物检测完整.pdf

预览
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲，该文档总共16页，到这已经超出免费预览范围，如果喜欢就直接下载吧～

下载提示 文本预览

如果您无法下载资料，请参考说明：

1、部分资料下载需要金币，请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档，再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压，在使用对应软件打开

口服液,蜜丸)的微 生物检测完整 文档资料可直接使用，可编辑，欢迎下载 适用对象]药学、药学（医药营销方向）、药物制剂、中药学、中药学（国际交流方向）、 制药工程、中药学（知识产权保护方向）专业 [实验学时]2学时 一、实验目的 了解药物微生物学检测项目，掌握口服药物以及其他药物的微生 物学检测过程。 二、预习与参考 药物中的微生物多来源于原材料和外界环境，中草药的原材料多 为植物的根、茎、叶，受微生物污染的机会更多，为保证药物的质量， 除对药物进行药效、药理学测定外还要进行微生物学的检测。根据给 药途径和使用的不同，将药物限定划分为两类，一类为规定灭菌药物， 它们包括注射剂、输液剂，体腔、眼科、烧伤、溃疡创面等用药。这 类药物中绝对无活菌存在，因此要对这类药物进行无菌测试；另一类 为非规定无菌药，包括各类口服药及皮肤外用药，这类药由于来源、 制备条件等原因可能含有不同种类和数量的活的微生物，只要染菌量 在药典规定的范围内且保证不含有特定的致病菌，一般对药物质量无 大的影响。为保证药物的质量和用药的安全性这类药物中的微生物的 种类和数量必须限定在一定范围内。因此要对这类药物进行微生物限 度检测。 我国药典规定口服的不含生药粉的丸剂细菌总数小于1000，霉 菌总数小于100，含生药粉的丸剂细菌总数小于30000，霉菌总数小 于100；煎膏剂和糖浆剂，细菌总数小于100，霉菌总数小于100； 不同的药物细菌的限定不同。大肠杆菌来源于人和动物的粪便，药物 中检出大肠杆菌说明药物曾被粪便污染，可能存在其他肠道致病菌， 1、细菌、霉菌（包括酵母菌）计数——平皿菌落计数法 1)供试液的制备：无菌操作，取10ml中药口服液或10g蜜丸分 别加入稀释液（生理盐水）90ml或100ml，混匀即为供试液。进一步 稀释成1：100、1：1000等适宜的稀释级。 2）分别用无菌的吸管取不同稀释级的供试液1ml，置于直径90cm 无菌平皿中，在加入准备好的无菌的约45℃的各种培养基（经过无 菌和灵敏度测试的）15ml混匀待凝固后，倒置培养，每个稀释级应 作2—3个平皿；另取稀释液1ml分别置4个无菌平皿中再加入细菌、 霉菌的45℃的各种培养基（经过无菌和灵敏度测试的）15ml混匀作 阴性对照。 3）细菌计数培养用营养琼脂培养基，霉菌计数培养用玫瑰红钠 琼脂培养基。 4）细菌培养温度为37℃，培养48小时，但在24小时、48小时 可点计菌落数，以48小时为准，统计培养基上生长的菌落数，一般 选取菌落数在30——300之间的平皿进行计数为好，然后乘以稀释倍 数，即得每克或每毫升被检药物中的细菌总数。霉菌培养温度为25 ——28℃，培养72小时，但在48小时及72小时可点计菌落数，以 72小时为准，一般选取菌落在5—50平皿计数，乘以稀释倍数即为 每克或每毫升药品中的霉菌总数。 2、大肠杆菌检查 1）取供试液10ml,加到100ml胆盐乳糖培养基，；再取10ml含 50—100个菌（大肠杆菌）的对照菌液加到100ml胆盐乳糖培养基做 阳性对照；最后取10ml稀释液加到100ml胆盐乳糖培养基做阴性对 37℃培养18——24小时，阴性对照应无菌生长（不混浊）。 2）取上述3种培养物各0.2ml分别接种置5mlMUG（4-甲基伞形 酮葡糖苷酸培养基）培养基内，37℃培养24小时，分别于5小时与 24小时取未接种的MUG培养基管作本底对照，将各培养管置365nm 紫外光下观察，呈现荧光的为阳性，无荧光的为阴性。 3）在MUG培养管滴加靛基质指示剂，液面呈现玫瑰红色为靛基 质试验阳性。 当阴性对照阴性（培养基不混浊、MUG阴性、靛基质阴性）；阳 性对照细菌正常生长；供试液胆盐乳糖培养基澄清，MUG阴性，靛基 质阴性，判断未检出大肠杆菌。相反，当阴性对照阴性；阳性对照细 菌正常生长；供试液胆盐乳糖培养基混浊，MUG阳性，靛基质阳性， 判断检出大肠杆菌。 4）若供试液MUG阳性，靛基质阴性或MUG阴性，靛基质阳性， 应取供试液胆盐乳糖培养物划线接种于麦康凯琼脂平板，37℃培养 18—24小时，如无菌落生长，判断未检出大肠杆菌；有菌落生长， 应挑取2—3个可疑菌落做靛基质试验（I）、甲基红试验（M）、乙酰 甲基甲醇生成试验（VP）、枸橼酸盐利用试验（C）和革兰氏染色进一 步的判断；大肠杆菌IMViC结果++--,革兰阴性散在排列的短小杆 菌。 营养琼脂，玫瑰红钠琼脂，胆盐乳糖培养基，需氧菌、厌氧菌 培养基，MUG培养基，真菌培养基，麦康凯琼脂，生理盐水，无菌试 管，无菌吸管，阳性对照菌（藤黄微球菌、生孢梭菌、白色念珠菌、 大肠杆菌）。 五、实验要求 、为使检测结果具有代表性，所测药物除随机采样外，还要求 具有一定的量，每