实验五 细菌生理生化反应.pdf

细菌鉴定中常用的生理生化反应

生05边晔2010030026
周四班同组成员：徐竞
实验时间2012年11月15日
一、实验目的

1.了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；
2.通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型
的多样性；
3.了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；
4.学习各种接种技术。

二、实验原理

1.各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质分解能力也不一样，因而代谢的产
物存在差别。
2.细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。（具体原理略）
3.用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细
菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。

三、实验器材

1.仪器和用具
恒温培养箱。试管：每个试验4根试管(3根接种，1根对照)。
接种环、接种针、酒精灯、试管架、记号笔、打火机、杜氏小管。
2.微生物
大肠杆菌（Escherichiacoli）、变形杆菌（Proteusvulgaris）、枯草杆菌（Bacillussubtilis）、
产气杆菌（Enterobacteraerogenes）和未知菌S3的各自悬液。
3.试剂
甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂。
上次配制的试管培养基（葡萄糖/乳糖发酵培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，胰蛋白
胨水培养基，硫化氢试验培养基，明胶液化培养基，柠檬酸盐培养基），淀粉培养基
平板。

四、实验步骤

1.培养基配制（上次实验制备）
1)葡萄糖/乳糖发酵培养基（用于糖发酵实验）
胰蛋白胨5g
NaCl2.5g
水500ml
制法：
a)将上述成分混合于水中溶解，矫正pH至7.4—7.6。
b)加葡萄糖/乳糖5g，溶解后加入0.5ml的1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，混匀。
c)分装于60支试管内，每管5ml。
d)每管倒置一个杜氏小管，加盖，115℃灭菌30min。

2)葡萄糖蛋白胨水培养基（用于甲基红和VP实验）
蛋白胨2.5g
葡萄糖2.5g
磷酸氢二钾2.5g
蒸馏水500ml
制法：
a)将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解后，调pH至7.2。
b)分装于120支试管中，每管5ml。0.06MPa灭菌30min。

3)胰蛋白胨水培养基（用于吲哚实验）
胰蛋白胨5g
NaCl2.5g
水500ml
制法：
a)将上述成分混合于水中溶解，矫正pH至7.4—7.6。
b)分装于60支试管中，每管5m1。0.06MPa灭菌30min。

4)柠檬酸盐培养基（用于柠檬酸盐利用实验）
氯化钠2.5g
硫酸镁0.1g
磷酸氢二铵0.5g
磷酸二氢钾0.5g
柠檬酸钠1g
琼脂10g
1%溴麝香草酚蓝酒精液5ml
蒸馏水500ml
制法：
a)将上述各成分(溴麝香草酚蓝除外)加热溶解，矫正至pH6.8。
b)加入溴麝香草酚蓝混匀，分装60支试管，每管约5ml。
c)高压灭菌0.1MPa20min后制成斜面。

5)明胶培养基（用于明胶液化实验）
牛肉膏2.5g
蛋白胨5g
NaCl2.5g
明胶60g
水500ml
制法：
a)将上述成分溶化，调pH7.2-7.4。
b)加入明胶，分装到60支试管，每支5ml。
c)0.06MPa，30min灭菌。

6)硫化氢实验培养基（用于硫化氢实验）
蛋白胨10g
NaCl2.5g
柠檬酸铁铵0.25g
硫代硫酸钠0.25g
琼脂4g
水500ml
制法：
a)调pH至7.2后，用水将琼脂加热溶解。
b)分装到60支试管，0.1MPa20min灭菌后备用。

7)淀粉培养基（用于淀粉水解实验）
蛋白胨10g
牛肉膏5g
可溶性淀粉2g
NaCl5g
琼脂20g
水1000ml
制法：
a)取少量水将淀粉调成糊状，再加入到已溶化好的培养基中，定容到1000ml。
b)调pH至7.2，分装于三角瓶，115℃、25min灭菌后冷却到60℃左右，无菌操
作倒入无菌培养皿中制作平板培养基。

2.培养基的标记。
用记号笔在试管上标明培养基的名称，所接种的菌名，和实验组号；

3.接种
取不同培养基，按照实验要求从相应细菌悬液中取菌接种。
如下表所示。

图1淀粉水解实验接菌图

表1各培养基接种细菌
编号实验名称大肠杆枯草芽产气杆变形杆未知菌空白对
菌孢杆菌菌菌S3照
1葡萄糖发酵○XX○○-
2乳糖发酵○XX○○-
3甲基红○X○X○-
4伏普○X○X○-
5吲哚○X○X○-
6硫化氢○XX○○-
7明胶液化○○XX○-
8淀粉水解○○○○○-
9柠檬酸盐利用○X○X○-

4.对以下实验组进行相应处理后再观察结果
1)甲基红试验加甲基红试剂数滴；
2)V.P.加入40％KOH5~10滴后，再加入等量的α-萘酚溶液，再在37度恒温箱保