制备骨髓浓缩细胞的方法及其用于治疗卵巢早衰的用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113980894A(43)申请公布日2022.01.28(21)申请号202111606784.9(22)申请日2021.12.27(71)申请人深圳博雅感知医疗科技有限公司地址518122广东省深圳市坪山区坑梓街道秀新社区锦绣中路14号深福保现代光学厂区B栋501-A20(72)发明人肖海蓉李容徐勇(51)Int.Cl.C12N5/077(2010.01)A61K35/28(2015.01)A61P15/00(2006.01)权利要求书2页说明书15页(54)发明名称制备骨髓浓缩细胞的方法及其用于治疗卵巢早衰的用途(57)摘要本发明涉及制备骨髓浓缩细胞的方法及其用于治疗卵巢早衰的用途。制备骨髓浓缩细胞的方法步骤为：(1)提供生物样本骨髓穿刺液，使其置于无菌袋中；(2)取下细胞自动分离系统输入管的护帽，将注射器连接到输入管鲁尔锁定接头上，通过血栓过滤器，将抗凝的生物样本转移到一次性无菌分离杯中，沿水平轴摇动混合样本；(3)将一次性分离杯放入控制模块中，放置于可编程的离心机中，并按照规定程序设定离心机的参数，(5)离心完成后，从控制模块中取出分离杯，将注射器连接至分离杯与回收舱室连通的输出管上，收集得到的骨髓浓缩细胞。本发明方法呈现如说明书所述优良技术效果。CN113980894ACN113980894A权利要求书1/2页1.制备骨髓浓缩细胞的方法，其包括如下步骤：(1)提供生物样本骨髓穿刺液，使其置于含有抗凝剂的无菌袋中备用；所述抗凝剂为3.2%枸橼酸钠溶液，其中增补添加0.5mg/ml组氨酸和0.1mg/ml磷脂酰胆碱；(2)取下细胞自动分离系统的输入管上的护帽，将注射器连接到输入管鲁尔锁定接头上，以缓慢而稳定的速度通过血栓过滤器，将抗凝的生物样本转移到一次性无菌分离杯中，沿水平轴摇动混合样本；所述细胞自动分离系统是封闭式的PXP分离系统，其由四个部件组成：a)一次性无菌分离杯、b)控制模块、c)用于传输数据的分离底座、d)DataTrak软件处理系统；(3)将一次性分离杯放入控制模块中，离心前控制模块状态显示为“0”，将分离杯/控制模块组件称重，配平后，放置于可编程的离心机中，并按照如下程序设定离心机的参数：(4)启动离心机进行离心，进程如下：4a)P1期使生物样本中的细胞通过离心密度分层在一次性分离杯中分为下中上三个组分：红细胞层、细胞浓缩层、血浆层；4b)P2期使大部分红细胞进入红细胞回收舱；4c)P3期进一步将处理室中的细胞分层，P4期降低离心力以进一步除去红细胞；4d)P5期使细胞浓缩层和血浆进一步分层，至P6期降低离心力，使细胞浓缩层通过输送管转移至回收舱室，血浆保留在中央舱室中；(5)离心完成后，确认控制模块窗口显示“P”即合格状态，从控制模块中取出分离杯，将注射器连接至分离杯与回收舱室连通的输出管上，收集得到的骨髓浓缩细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)提供的生物样本的体积为20~200ml。3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中另外抽取1ml样本以备检测。4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)所用抗凝剂与生物样本的体积比为1：12。5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)所用抗凝剂的配制方法为：使枸橼酸钠、组氨酸和磷脂酰胆碱加至适量水中，加热至60°C搅拌使溶解，加水至全量，0.22µm微孔滤膜过滤，121°C热压灭菌，即得。6.根据权利要求1所述的方法，其还包括以下步骤：(6)使分离杯和控制模块置于分离底座上以传输数据并用DataTrak软件处理系统处理离心过程中所捕获的数据。7.一种骨髓浓缩细胞，其是通过权利要求1~6任一项所述方法制备得到的。8.骨髓浓缩细胞在制备用于治疗卵巢早衰的细胞治疗剂中的用途，所述骨髓浓缩细胞2CN113980894A权利要求书2/2页是通过权利要求1~6任一项所述方法制备得到的。3CN113980894A说明书1/15页制备骨髓浓缩细胞的方法及其用于治疗卵巢早衰的用途技术领域[0001]本发明属于生物技术和生物医药领域，涉及使用细胞治疗剂治疗卵巢早衰(Prematureovarianfailure，POF)的方法。具体地说，本发明涉及从骨髓穿刺液(Bonemarrowaspirate)中快速分离制备骨髓浓缩细胞(Bonemarrowaspirateconcentrate，骨髓浓缩物，BMAC)的细胞治疗剂，进而使用此种骨髓浓缩细胞治疗早发性卵巢功能不全和卵巢早衰的方法。使用本发明方法可以有效的提高从骨髓穿刺液中分离骨髓浓缩细胞的效率，提供一种安全、高效、简捷获得骨髓浓缩细胞制剂用于治疗卵巢早衰和卵巢功能不全例如早发性卵巢功能不全的方法。通过使用PXP®自动细胞快速处