脐带血浓缩细胞治疗卵巢早衰的细胞治疗剂.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114177203A(43)申请公布日2022.03.15(21)申请号202111606791.9(22)申请日2021.12.27(71)申请人博雅干细胞科技有限公司地址214092江苏省无锡市滨湖区马山梅梁路88号博雅干细胞公司(72)发明人肖海蓉李容徐勇(51)Int.Cl.A61K35/51(2015.01)A61K47/12(2006.01)A61P15/08(2006.01)C12N5/078(2010.01)权利要求书2页说明书15页(54)发明名称脐带血浓缩细胞治疗卵巢早衰的细胞治疗剂(57)摘要本发明涉及脐带血浓缩细胞治疗卵巢早衰的细胞治疗剂。一方面，本发明制备脐带血浓缩细胞制剂的方法包括如下步骤：提供生物样本脐带血，使其置于含有抗凝剂的无菌袋中备用；取下细胞自动分离系统的输入管上的护帽，将注射器连接到输入管鲁尔锁定接头上，以缓慢而稳定的速度通过血栓过滤器，将抗凝的生物样本转移到一次性无菌分离杯中，沿水平轴摇动混合样本；将一次性分离杯放入控制模块中，于可编程离心机中离心，得到的脐带血浓缩细胞制剂。本发明还涉及上述方法制备得到的脐带血浓缩细胞制剂，以及它们在制备用于治疗卵巢早衰的细胞治疗剂中的用途。本发明细胞制剂呈现优良效果。CN114177203ACN114177203A权利要求书1/2页1.制备脐带血浓缩细胞制剂的方法，其包括如下步骤：(1)提供生物样本脐带血，使其置于含有抗凝剂的无菌袋中备用；(2)取下细胞自动分离系统的输入管上的护帽，将注射器连接到输入管鲁尔锁定接头上，以缓慢而稳定的速度通过血栓过滤器，将抗凝的生物样本转移到一次性无菌分离杯中，沿水平轴摇动混合样本；所述细胞自动分离系统是封闭式的PXP分离系统，其由四个部件组成：a)一次性无菌分离杯、b)控制模块、c)用于传输数据的分离底座、d)DataTrak软件处理系统；(3)将一次性分离杯放入控制模块中，离心前控制模块状态显示为“0”，将分离杯/控制模块组件称重，配平后，放置于可编程的离心机中，并按照如下程序设定离心机的参数：程序号加速减速相对离心力/RCF时间/minP19920008.5P299502P3995002.5P499501P5992500.5P699501(4)启动离心机进行离心，进程如下：4a)P1期使生物样本中的细胞通过离心密度分层在一次性分离杯中分为下中上三个组分：红细胞层、细胞浓缩层、血浆层；4b)P2期使大部分红细胞进入红细胞回收舱；4c)P3期进一步将处理室中的细胞分层，P4期降低离心力以进一步除去红细胞；4d)P5期使细胞浓缩层和血浆进一步分层，至P6期降低离心力，使细胞浓缩层通过输送管转移至回收舱室，血浆保留在中央舱室中；(5)离心完成后，确认控制模块窗口显示“P”即合格状态，从控制模块中取出分离杯，将注射器连接至分离杯与回收舱室连通的输出管上，收集得到的脐带血浓缩细胞制剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中：步骤(1)提供的生物样本的体积为20～350ml；步骤(1)中另外抽取1ml样本以备检测；和/或，步骤(1)所用抗凝剂为枸橼酸钠溶液。3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)所用抗凝剂为3.6％枸橼酸钠溶液。4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)所用抗凝剂为3.6％枸橼酸钠溶液，其中增补添加0.5mg/ml组氨酸和0.15mg/ml磷脂酰胆碱。5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)所用抗凝剂与生物样本的体积比为1：12。6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)所用抗凝剂的配制方法为：使枸橼酸钠、组氨酸和磷脂酰胆碱加至适量水中，加热至60℃搅拌使溶解，加水至全量，0.22μm微孔滤膜过滤，121℃热压灭菌，即得。7.根据权利要求1所述的方法，其还包括以下步骤：(6)使分离杯和控制模块置于分离底座上以传输数据并用DataTrak软件处理系统处理离心过程中所捕获的数据。8.一种脐带血浓缩细胞制剂，其是通过包括如下步骤的方法制备得到的：(1)提供生物样本脐带血，使其置于含有抗凝剂的无菌袋中备用；(2)取下细胞自动分离系统的输入管上的护帽，将注射器连接到输入管鲁尔锁定接头2CN114177203A权利要求书2/2页上，以缓慢而稳定的速度通过血栓过滤器，将抗凝的生物样本转移到一次性无菌分离杯中，沿水平轴摇动混合样本；所述细胞自动分离系统是封闭式的PXP分离系统，其由四个部件组成：a)一次性无菌分离杯、b)控制模块、c)用于传输数据的分离底座、d)DataTrak软件处理系统；(3)将一次性分离杯放入控制模块中，离心前控制模块状态显示为“0”，将分离杯/控制模块组件称重，配平后，放置于可编程的离心机中，并按照如下程序设定离心机