大泷六线鱼微卫星位点及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106434644A(43)申请公布日2017.02.22(21)申请号201610989083.0(22)申请日2016.11.08(66)本国优先权数据201610910340.72016.10.13CN(71)申请人国家海洋局第一海洋研究所地址266061山东省青岛市崂山区仙霞岭路6号(72)发明人王波郑风荣沈朕胡发文(51)Int.Cl.C12N15/11(2006.01)C12Q1/68(2006.01)权利要求书1页说明书16页序列表9页(54)发明名称大泷六线鱼微卫星位点及其应用(57)摘要本发明公开了一类大泷六线鱼微卫星位点及其应用，所述的微卫星位点具有选自SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.15任一所示的核苷酸序列。所述微卫星位点可有效地应用于大泷六线鱼种群遗传学研究的遗传标记。本发明还提供了特异性扩增所述的微卫星位点序列的引物，所获引物的扩增结果具有高度的多态性和稳定性，为大泷六线鱼的遗传多样性以及种群间的亲缘关系的鉴定提供资料，弥补现有技术的不足。本发明还提供微卫星位点在大泷六线鱼群体遗传学分析、个体鉴定或分子辅助育种方面的应用。CN106434644ACN106434644A权利要求书1/1页1.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸具有选自序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.15任一所示的核苷酸序列。2.权利要求1所述的多核苷酸的用途，其特征在于，所述的多核苷酸作为微卫星标志物用于大泷六线鱼群体遗传学分析，遗传多样性检测，数量性状遗传图谱，遗传连锁作图，家系和个体鉴定，分子辅助育种。3.大泷六线鱼微卫星位点，其特征在于，选自序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.15任一所示的核苷酸序列，或选自任一在严格条件下与权利要求1中的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。4.权利要求3所述大泷六线鱼微卫星位点的组合，其特征在于选自权利要求3中所述大泷六线鱼微卫星位点的两种或多种。5.在选自权利要求1中SEQIDNO：1-15任一所述的微卫星位点两端的侧翼序列上设计的大泷六线鱼微卫星引物。6.如权利要求5所述的引物，其特征在于，所述的引物是引物对，所述的引物对具有选自以下序列对所示的序列：SEQIDNO：16和SEQIDNO：17；SEQIDNO：18和SEQIDNO：19；SEQIDNO：20和SEQIDNO：21；SEQIDNO：22和SEQIDNO：23；SEQIDNO：24和SEQIDNO：25；SEQIDNO：26和SEQIDNO：27；SEQIDNO：28和SEQIDNO：29；SEQIDNO：30和SEQIDNO：31；SEQIDNO：32和SEQIDNO：33；SEQIDNO：34和SEQIDNO：35；SEQIDNO：36和SEQIDNO：37；SEQIDNO：38和SEQIDNO：39；SEQIDNO：40和SEQIDNO：41；SEQIDNO：42和SEQIDNO：43；SEQIDNO：44和SEQIDNO：45。7.权利要求5或6所述大泷六线鱼微卫星引物或其组合在大泷六线鱼群体遗传学分析，遗传多样性检测，数量性状遗传图谱，遗传连锁作图，家系和个体鉴定，分子辅助育种。8.一种用于大泷六线鱼遗传多样性检测的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有：选自权利要求5或6中任一所示的引物。9.一种大泷六线鱼遗传多样性检测方法，包括以下步骤：1)基因组DNA的提取；2)微卫星PCR扩增：采用权利要求5或6所述微卫星引物扩增大泷六线鱼基因组DNA，获得其扩增产物；3)扩增产物电泳：在毛细管电泳基因分析仪上电泳，对毛细管电泳数据初步处理；4)遗传多样性分析：根据每个个体微卫星扩增产物的分子量的大小取定基因型，计算遗传多样性参数。2CN106434644A说明书1/16页大泷六线鱼微卫星位点及其应用技术领域[0001]本发明属于分子生物学DNA分子标记技术领域，具体涉及大泷六线鱼SSR分子标记的开发及遗传多样性以及种群间的亲缘关系的鉴定。背景技术[0002]大泷六线鱼(学名：Hexagrammosotakii)为六线鱼科六线鱼属的鱼类。分布于朝鲜、日本以及中国东海、黄海、渤海等海域，系冷温性近海底层鱼类。大泷六线鱼的食性很广，以底栖生物为主，也摄食小虾、小鱼。目前，国内外有关大泷六线鱼的研究报道还比较少，主要集中在生物学地位、生态分布以及种群资源量，还有一些学者对其生理、生化等方面进行了研究，但目前对于大泷六线鱼微卫星方面的研究则不多。这在一定程度上限制了大泷六线鱼的遗传育种和品质改良。[0003]微卫星标记(SSRs：simplesequencerepeats)或短串联重复(Shorttandemre