一种大泷六线鱼精子低温保存液.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112931491A(43)申请公布日2021.06.11(21)申请号202110469108.5(22)申请日2021.04.28(71)申请人山东省海洋生物研究院地址266104山东省青岛市崂山区游云路7号(72)发明人邹琰宋爱环胡发文王英俊高凤祥吴海一(74)专利代理机构北京开阳星知识产权代理有限公司11710代理人姚金金(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种大泷六线鱼精子低温保存液(57)摘要本发明属于精子低温保藏技术领域，具体涉及一种大泷六线鱼精子低温保存液。包括以下组分：以HBSS溶液为基础液，体积浓度为5％的乙二醇为低温保护剂，再添加牛血清蛋白、青霉素、链霉素制成；其中，HBSS溶液浓度为950μl/ml，乙二醇浓度为50μl/ml，牛血清蛋白浓度为1μl/ml、青霉素浓度为500IU/ml、链霉素浓度为500IU/ml。本发明提供了一种适用于大泷六线鱼精子低温(0‑4℃条件下)保存的稀释液，为大泷六线鱼良种选繁育和渔业生产提供技术支撑；该发明方法中的精子低温保存液可有效抑制精子活力，延长精子寿命，可满足大泷六线鱼良种选繁育对精子的需求。CN112931491ACN112931491A权利要求书1/1页1.一种大泷六线鱼精子低温保存液，其特征在于包括以下组分：以HBSS溶液为基础液，体积浓度为5％的乙二醇为低温保护剂，再添加牛血清蛋白、青霉素、链霉素制成；其中，HBSS溶液浓度为950μl/ml，乙二醇浓度为50μl/ml，牛血清蛋白浓度为1μl/ml、青霉素浓度为500IU/ml、链霉素浓度为500IU/ml。2.如权利要求1所述的大泷六线鱼精子低温保存液，其特征在于：精子与低温保存液的稀释比为1：50。2CN112931491A说明书1/5页一种大泷六线鱼精子低温保存液技术领域：[0001]本发明属于精子低温保藏技术领域，具体涉及一种大泷六线鱼精子低温保存液。背景技术：[0002]大泷六线鱼(Hexagrammosotakii)又名欧式六线鱼，俗称黄鱼、黄棒子等，隶属于鲉形目(Scorpaeniformes)、六线鱼科(Hexagrammidae)、六线鱼属(Hexagrammos)。大泷六线鱼属近海冷温性底层鱼类，其肉味鲜美，有“北方石斑”之称。该鱼具有耐低温，生长迅速，肉质鲜嫩，适宜北方网箱和牧场养殖，具有极高的经济价值。近年来，随着其全人工繁育技术的突破，养殖规模不断扩大，但因其雌鱼怀卵量少，鱼卵极易粘结成团块状，其繁育过程仍以体外人工授精为主。目前，开展大泷六线鱼良种选繁育需在繁殖季节，运送成熟雄鱼至实验场地开展实验，运输成本高，且亲鱼在运输过程中容易死亡或因生长环境改变、营养不良导致性腺退化等问题，因此，筛选一种可低温保存大泷六线鱼精液的稀释液，用以延长精子的使用时效，不仅对其资种质资源保护具有重要意义，对大泷六线鱼良种选繁育也有重要的应用价值。[0003]目前，精子低温保存技术在猪、羊、马等家禽上开展了大量研究，并成功应用。鱼类精子的低温保存仅针对鲇鱼、鲤鱼、鲢鱼、大菱鲆等少数鱼类开展过相关试验。低温保存成功的关键在于将精液适当的稀释，根据精子结构、生理特性，控制温度、稀释液离子来降低其代谢率，延长器体外存活时间。因为不同种生物精子的渗透压、细胞液离子浓度都不同，故所用稀释液没有统一的标准，需要大量的实验才可筛选得出。目前针对海水鱼类精子低温保存液的研究较少，仅赵燕等(2006)开展过大菱鲆的实验，且只延长存活时间到5h，效果十分一般。经文献检索，未见与本发明大泷六线鱼精子低温保存液及配方的报道。发明内容：[0004]本发明要解决的技术问题是目前开展大泷六线鱼良种选繁育需在繁殖季节，需要运送成熟雄鱼至实验场地开展实验，运输成本高，且亲鱼在运输过程中容易死亡或因生长环境改变、营养不良导致性腺退化，造成人力物力的损失。[0005]为解决上述问题，本发明提供了一种适用于大泷六线鱼精子低温(0‑4℃条件下)保存液，为大泷六线鱼良种选繁育和渔业生产提供技术支撑；该发明方法中的精子低温保存液可有效抑制精子活力，延长精子寿命，可满足大泷六线鱼良种选繁育对精子的需求。[0006]为达到上述目的，本发明通过以下技术方案实现，一种大泷六线鱼精子低温保存液，包括以下组分：以HBSS溶液为基础液，体积浓度为5％的乙二醇为低温保护剂，再添加牛血清蛋白、青霉素、链霉素制成；其中，HBSS溶液浓度为950μl/ml，乙二醇浓度为50μl/ml，牛血清蛋白浓度为1μl/ml、青霉素浓度为500IU/ml、链霉素浓度为500IU/ml。[0007]其中，[0008]HBSS溶液作为低温保存液