半推理定点突变的源于黑曲霉 113的植酸酶基因及其表达.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102311964A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102311964A(43)申请公布日2012.01.11(21)申请号201010219287.9(22)申请日2010.07.06(71)申请人上海市农业科学院地址201106上海市闵行区北翟路2901号(72)发明人田永生熊爱生姚泉洪彭日荷赵伟高峰付晓燕许晶(74)专利代理机构上海开祺知识产权代理有限公司31114代理人费开逵(51)Int.Cl.C12N15/55(2006.01)C12N9/16(2006.01)C12N15/70(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表2页附图3页(54)发明名称半推理定点突变的源于黑曲霉113的植酸酶基因及其表达(57)摘要本发明涉及一种半推理定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因及其表达。所述定点突变的植酸酶基因含1350个碱基，编码氨基酸450个；其核苷酸序列如SEQIDNO1所示，其编码的氨基酸序列如SEQIDNO2所示。本发明的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因是在第53位含有一个突变位点。实验表明，本发明的定点突变的植酸酶基因的酶活性较野生型的提高了2.2倍，同时kcat/Km值也提高了3.08倍。CN1023964ACCNN110231196402311966A权利要求书1/1页1.一种半推理定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因，其特征在于，含1350个碱基，其核苷酸序列如SEQIDNO1所示。2.根据权利要求1所述的半推理定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因，其特征在于，编码氨基酸450个，其编码的氨基酸序列如SEQIDNO2所示。3.根据权利要求1所述的半推理定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因，其特征在于，其第53位发生单突变位点。4.权利要求1所述的半推理定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因在原核表达中的应用。2CCNN110231196402311966A说明书1/4页半推理定点突变的源于黑曲霉113的植酸酶基因及其表达技术领域[0001]本发明属微生物基因工程领域，具体涉及一种半推理定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因及其表达。背景技术[0002]植酸酶是催化植酸(肌醇六磷酸)及植酸盐水解成肌醇与磷酸的一类酶的总称。植酸酶作为一种单胃动物的饲料添加剂，它的饲喂效果已在世界范围内得到了确证。它可使植物性饲料中磷的利用率提高60％，粪便中磷的排出量减少40％，同时还可降低植酸的抗营养作用，因此在饲料中添加植酸酶对提高畜禽生产效益及降低植酸磷对环境的污染具有重要意义。[0003]自然界中产植酸酶的菌株有真菌、大肠杆菌、酵母等多种微生物，但不同来源的植酸酶的表达水平差异很大。近年来，通过基因工程手段在微生物反应器中高效表达植酸酶国内外已有很多成功的报道。来源于烟曲霉和枯草芽孢杆菌的植酸酶基因已在黑曲霉(Aspergillusniger)、汉逊酵母(Hansenulapolymorpha)、酿酒酵母(Saccharomyces)中得到了成功的表达；来源于黑曲霉的植酸酶基因也成功地在毕赤酵母(Pichiapastoris)中获得了高效表达。在分子水平上对目的基因进行改造，也可提高植酸酶表达量。发明内容[0004]本发明所要解决的技术问题在于提供一种半推理定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因及其表达。本发明通过定点突变对植酸酶基因进行改造，使改造后的植酸酶基因具有更高的活性。即利用定点突变对源于Aspergillusniger113的植酸酶基因phyIls进行基因改造，在不改变氨基酸的情况获得在大肠杆菌(Escherichiacoli)中的高效表达。[0005]所述的半推理定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因，含1350个碱基，编码氨基酸450个。[0006]所述的半推理定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因，其核苷酸序列如SEQIDNO1所示，其编码的氨基酸序列如SEQIDNO2所示。[0007]所述的半推理定点突变的植酸酶基因与野生型植酸酶基因相比，其第53位发生单突变位点。[0008]所述的半推理定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因可在原核表达中获得高效表达。与野生型的植酸酶比较，本发明的定点突变的源于Aspergillusniger113的植酸酶基因的酶活性提高了2.2倍，同时kcat/Km值也提高了3.08倍。附图说明[0009]图1为不同来源的植酸酶基因第5