微生物论文---自来水中细菌总数的测定.pdf

自来水中细菌总数的测定

姓名：吴燕卓指导老师：陈燕飞
（太原师范学院生物系091班学号：2009131124）

摘要水是微生物广泛分布的天然环境。水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物（如光

合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等［1］。水中的病

原菌主要来自于人和动物的传染性排泄物。我国饮用水卫生标准（GB5749-85）规定每毫升水样细

菌总数37℃培养24h不得超过100个。所谓细菌总数，指1mL水样中所含的细菌菌落的总数。目前

一般采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在保证无菌的环境下，采取自来水的样品，利用培养基制作

平板［2］。按菌落计数方法进行计数，通过实验测得的菌数对照国家饮用水标准来判断水质［3］。对自

来水用平板菌落技术测定细菌总数，通过观测得到如下结果：在显微镜下可观察到众多的菌落且种

类繁多，取其平均值得到，自来水中细菌总数为13/mL。自来水的微生物学检验，在保证饮水安全

和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。

关键字自来水平板菌落计数技术牛肉膏蛋白胨琼脂培养基乳白色菌细菌总数

前言平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一

定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个

单菌落应代表原样品中的一个单细胞。细菌总数是指水样在一定条件下培养后（培养基成分，培养

温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL水样所含菌落的总数。本实验只包括一群能在营养琼脂

上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数［4］。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。除采用

平板计数技术测定水中细菌总数外，现在已有许多种快速、简便的微生物检测仪或试剂纸等也用来

测定水中细菌总数［5］。

水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断

水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。自来水的微生物学检验，在保证饮水安全

和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标［6］。

1

1材料与方法

1.1材料、试剂与仪器

1.1.1实验的时间与地点：2010年11月1日———太原师范学院（南区）微生物学实验室

1.1.2材料：自来水

1.1.3试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、1moL/LNaOH、1moL/LHCL、灭菌水

1.1.4仪器：高压蒸气灭菌锅、培养皿、三角烧瓶、天平、牛角匙、pH试纸（pH5.5-9.0）、麻绳、

牛皮纸、量筒、玻璃棒、电热炉、称量杯

1.2实验方法

1.2.1灭菌［7］

1.2.1.1灭菌物品的放入：首先将高压蒸气灭菌锅的内锅层取出,再向外锅内加入适量的水,使水面与

三角搁架相平为宜。放回内锅层,并加入用报纸包好的培养皿、三角烧瓶、吸管。加盖，并

将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，

使螺旋松紧一致，勿使漏气。

1.2.1.2高压蒸气灭菌锅的调节：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷气。待冷空气完全排尽后，

关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力上升到所需压力时，通

过高压蒸汽灭菌锅上的按钮调节压力、温度和时间，维持压力至所需时间。本实验用

0.1MPa,121℃,20min灭菌。灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表

的压力降至“0”时打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。

1.2.2水样的采取

先放开水龙头使水流5min后，用灭菌后的三角烧瓶接取水样，迅速地进行分析。

1.2.3制备牛肉膏蛋白胨培养基［6］

1.2.3.1称量

用天平称量33g牛肉膏蛋白胨培养基粉末置于烧杯中。

1.2.3.2溶化

在上述烧杯中加入1000mL蒸馏水，然后，在石棉网上加热，并用玻璃棒搅拌直至沸腾2分

钟。

2
1.2.3.3调pH

在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH。如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴

加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/L

HCl调节。

1.2.4细菌总数测定

1.2.4.1加水：灭菌吸管吸取1mL水样，注入其中一套灭菌的培养皿中。共做2个培养皿。

1.2.4.2加培养基：分别倾注约15mL已溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即

在桌上作平面摇动，使自来水水样与培养基充分混匀。

1.2.4.3空白对照：另取一空的灭菌培养皿，不加水样，直接倾注牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL，

作空白对照。

1.2.4.4培养计数：待培