一种诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107094622A(43)申请公布日2017.08.29(21)申请号201710255932.4(22)申请日2017.04.18(71)申请人天津农学院地址300384天津市西青区津静路22号(72)发明人梁发辉刘艳军杨静慧黄唯子黄晗达李佳益张超(74)专利代理机构天津盛理知识产权代理有限公司12209代理人王来佳(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法(57)摘要本发明涉及树莓组织培养技术领域，尤其是一种诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法，包括如下步骤：步骤1：剪取树莓无菌苗两叶片间的茎段作为外植体，接种到愈伤组织诱导培养基上，得到树莓的松散型愈伤组织；步骤2：取培养好的松散型愈伤组织，接种到只有无菌水的无菌培养皿中，进行饥饿诱导培养，得到胚性愈伤组织；步骤3：将所述胚性愈伤组织接种到MS培养基中，进行胚状体培养，得到球形胚；采用本方法，因为不必经过激素诱导，因此可节约研究时间，且针对胚性愈伤组织和球形胚具有极高的诱导率。CN107094622ACN107094622A权利要求书1/1页1.一种诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1：剪取树莓无菌苗两叶片间的茎段作为外植体，接种到愈伤组织诱导培养基上，得到树莓的松散型愈伤组织；步骤2：取培养好的松散型愈伤组织，接种到只有无菌水的无菌培养皿中，进行饥饿诱导培养，得到胚性愈伤组织；步骤3：将所述胚性愈伤组织接种到MS培养基中，进行胚状体培养，得到球形胚。2.根据权利要求1所述的诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法，其特征在于：所述步骤1中，愈伤组织培养基为1/2MS+0.5-1.0mg/L2,4-D+100mg/LVc+20g/L蔗糖，PH值5.8。3.根据权利要求2所述的诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法，其特征在于：所述步骤1中，愈伤组织培养条件为23-25℃，光照时间12小时，光照强度为500-1000lux，培养时间14-21天。4.根据权利要求1所述的诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法，其特征在于：所述步骤2中，的饥饿诱导方法是将树莓松散型愈伤组织切成大小2mm的小块，无菌的培养皿内放置无菌滤纸，培养皿中加入少量的无菌水，水量以全部浸湿滤纸为准。5.根据权利要求4所述的诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法，其特征在于：所述步骤2中，的饥饿诱导培养条件是：光照强度为2000lux，光照时间为24h；温度为23℃，饥饿诱导时间为6d。6.根据权利要求1所述的诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法，其特征在于：所述步骤3中，胚性愈伤组织接种到MS+20g/L蔗糖培养基中，PH值5.8。7.根据权利要求6所述的诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法，其特征在于：所述步骤3中，胚性愈伤组织培养条件是：光照强度为500-1000lux，光照时间为12h；温度为23-25℃℃，培养时间14-21d。2CN107094622A说明书1/6页一种诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法技术领域[0001]本发明涉及树莓组织培养技术领域，尤其是一种诱导树莓愈伤组织形成球形胚的方法。背景技术[0002]树莓作为新兴的功能性水果，因其营养丰富，越来越受到消费者的欢迎，市场的需求也变得越来越大。随着树莓的种植面积的扩大，对树莓的种源要求也变得多样化，因此加快树莓的育种研究变得十分紧迫。[0003]树莓多为野生品种，经过人工选育获得的栽培品种，是遗传相对稳定的植物品种，通过常规的杂交，很难获得新的优良性状，常规育种发展遇到瓶颈。而基因转化技术又受到市场的制约，不能产业化，因此，目前树莓的育种基本采用诱变技术。常规的物理及化学诱变多采用种子或植株，诱变效率极低，采用胚性愈伤组织进行诱变育种，可以大大提高诱变效率。但由于胚性愈伤组织诱导较为困难，如何提高胚性化细胞的诱导率是极需解决的问题。[0004]据检索，没有发现有关树莓体细胞胚诱导方面的文献和专利，关于饥饿处理诱导胚性愈伤组织文献也很少，但发现诸多关于树莓营养繁殖和其他植物激素诱导体细胞胚的文献，具体公开内容可总结几类如下：[0005]1、文献2005年许欣然等在河南农业科学发表的《棉花优良品种中棉所27直接胚胎发生与植株再生》一文中提到了“饥饿处理”，但这里的饥饿处理是指外植体在培养基(MS无机盐+B5维生素)诱导下形成的愈伤组织少或无愈伤组织，不转瓶接着培养，这里的饥饿处理只是没有添加激素，实际上是有营养的，和本发明使用的无菌水是完全不一样的。[0006]2、文献2004年甘肃农业大学李尚中的硕士论文《小麦幼胚高频再生及外源DNA电击转化体系的研究》一文中提到了“低温(3-4