滇黄精的育苗方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107182780A(43)申请公布日2017.09.22(21)申请号201710290369.4(22)申请日2017.04.28(71)申请人玉溪市祥馨农业技术开发有限公司地址653100云南省玉溪市红塔区北城街道莲池社区九组三十二幢六号(72)发明人黄衡宇郭凤鸣李继祥金鹏程肖文俊李培源张靖东(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称滇黄精的育苗方法(57)摘要滇黄精的育苗方法，步骤包括：滇黄精外植体准备，消除褐化培养，愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养，促进根茎生长的暗培养，试管苗复壮培养，生根培养，炼苗培养；有益效果是：滇黄金外植体在培养基A中进行每隔7天的转接培养，去除组培过程中出现的褐化现象效果显著；同时进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖培养，提高了繁殖效率，繁殖系数可提高到8.67以上，组培时间可缩短至45d；暗培养阶段，滇黄精根茎的发达程度大幅提高，成活率可达95%以上；本发明分阶段采用四种培养基转接培养，克服了滇黄精进行组培育苗时容易滋生真菌和积累病毒的问题，培养出来的种苗适应性及抗逆性极强，降低了组培苗污染率，提高了品种种性的稳定性。CN107182780ACN107182780A权利要求书1/1页1.滇黄精的育苗方法，其特征在于，具体方案包括以下步骤：（1）滇黄精外植体准备：每年春季，将生长旺盛的滇黄精根茎从土中挖出，用毛刷洗去泥土，然后用解剖刀切取带幼芽根茎，用质量比为20%的洗衣粉水溶液浸泡10-15min，置流水下冲洗30-60min；冲洗后放到超净工作台上的烧杯中，烧杯中加入质量比为20%维生素C浸泡5-10min；然后用体积比为75%的乙醇浸泡30s后，转入质量比为0.1%的氯化汞中消毒5-8min，无菌水冲洗8-10次，每次不低于3min，得到滇黄精外植体，备用；（2）消除褐化培养：将准备好的滇黄金外植体接种于培养基A中，在光照度为1500-2000lx，光照时间为8h/d，温度为23±1℃的条件下进行培养，每七天更换新的培养基A继续培养，培养基A的更换次数不少于两次；培养基A是由每升蒸馏水中加入5000-10000mg的聚乙烯比格烷酸酮，1.0-3.0g的活性炭，1.0-10mg的氯化钠，15000mg的蔗糖和5300-5500mg的琼脂粉配制而成，培养基A的PH值在5.4-5.8之间；（3）愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养：将消除褐化后的滇黄精外植体接入培养基B中，在光照度为1500-2000lx，光照时间为12h/d，温度为23±1℃的条件下同步进行愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养；培养15d后滇黄精外植体的芽开始萌发长出叶片，并在基部出现愈伤组织；30d后愈伤组织表面开始出现不定丛芽；45d后丛芽分化率可达5.37；培养基B是由每升蒸馏水中加入1.5-2.0mg的玉米素，0.05-0.1mg的萘乙酸，30000mg的蔗糖，5300-5500mg的琼脂配制而成，培养基B的PH值在5.4-5.8之间；（4）促进根茎生长的暗培养：将诱导出的、健壮的不定芽丛分割为2-3株一丛，转接至新鲜的培养基B中，在无光照、温度控制在18±1℃的条件下进行暗培养，愈伤组织增殖、芽丛生长为丛芽的同时，基部根茎增多，30d后可获得根茎发达的丛生状白化试管苗；（5）试管苗复壮培养：将培养基B中根茎发达的白化试管苗带根茎切割为0.5cm×0.5cm大小转入培养基C中；在光照度为1500-2000lx，光照时间为12h/d，温度为23±1℃的条件下进行培养，培养30d后小根茎迅速生长，同时丛芽大量繁殖；45d后可获得生长健壮的试管苗；培养基C是由每升蒸馏水中加入1.5-2.0mg的玉米素，0.05-0.1mg的萘乙酸，5-10mg的多效唑，30000mg的蔗糖，5300-5500mg的琼脂配制而成，培养基C的PH值在5.4-5.8之间；（6）生根培养：将高为3-4cm长的试管苗接种于培养基D中，在光照度为1500-2000lx，光照时间为12h/d，温度为23±1℃的条件下进行培养，培养45d后获得长势健壮的生根苗；培养基D是由每升蒸馏水中加入0.5-1.5mg的萘乙酸，15000mg的蔗糖，5300-5500mg的琼脂配制而成，培养基D的PH值在5.4-5.8之间；（7）将6-8cm高的生根苗置于室温下炼苗3d后，从培养基中取出生根苗，清洗干净残留在生根苗上的培养基，放入质量浓度0.1-0.2%的多菌灵溶液（质量比）中消毒2-3min，假置在沙床上，保持空气湿度90%以上，用70%遮阳网遮阴，30d后成活率达95%以上；以后每隔10d喷施1次稀释20倍的MS营养液，30d后可移栽大