ABO血型鉴定操作规程.doc

太原市中医医院输血科SOP文件文件编号：TYZYYY-SXK-5109版本/修订号：2010/第二次主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23第页编写者：梁冀文校检者：崔玲珍审核者：朱永和PAGE\*MERGEFORMAT131目的指导工作人员进行ABO血型实验。2适用范围血型检验岗位工作人员3职责负责送检标本ABO血型的检测工作。4【原理】ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。【标本】1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。【器材】载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。【试剂】1.1抗-A、抗-B试剂1.25%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液1.3受检者血清1.4受检者5%和10%红细胞盐水悬液1.510mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管【操作步骤】2.1试管法2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A和抗-B分型血清各2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。2.1.5凝集强度判断标准4+=红细胞凝集成一大块,血清清晰透明；3+=红细胞凝集成几大块,血清尚清晰；2+=红细胞成中等大凝块,游离红细胞<1/2；1+=红细胞成小凝集块，游离红细胞>1/2；±=红细胞成微小凝集块，周围有很多游离红细胞。MF=混合凝集外观（mixedfieLd）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。-表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。2.1.6报告受检者红细胞ABO血型如下表所示：ABO血型鉴定结果判断分型血清＋受检者红细胞受检者血清＋试剂红细胞抗-A抗-B受检者血型A细胞B细胞O细胞＋－A－＋－－＋B＋－－－－O＋＋－＋＋AB－－－注+为凝集；-为不凝集2.2玻片法2.2.1查抗原：取清洁玻片1张，用记号笔分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A和抗-B分型血清各1滴于玻片标记相对应处,再以滴管分别加入受检者10%红细胞盐水悬液1滴，混匀。2.2.2查抗体：取清洁玻片1张，用记号笔分别标明A型、B型和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于玻片标记相对应处，再分别以滴管加入A、B、O型10%试剂红细胞悬液1滴，混匀。2.2.3将玻片不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集反应。如肉眼观察不见凝集,应再以低倍镜下观察有无凝集或溶血。2.2.4报告受检者红细胞ABO血型如下表所示：3．微柱凝胶法（1）标本：同试管法（2）原理：①人红细胞抗原与相应抗体发生特异性免疫反应（其本质为血凝反应）；②检测系统是在微柱中（载体）将反应介质凝胶（sephdexG-100或50葡聚糖胶）或小玻璃装入微柱中；③凝胶或小玻璃珠的间隙具有分子筛作用。凝集的红细胞（结合的）被留在微柱上面成带状或凝集颗粒散布凝胶中间。未凝集的红细胞（即未结合、游离的）通过离心后沉入微柱的底部；④微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗A、抗B试剂检测红细胞上相应的血型抗原，从而鉴定红细胞的血型。（3）操作：在微柱凝胶检测卡各管中各加入0.5％的红细胞生理盐水悬液1滴（或50µl）；即刻使用微柱凝胶离心机，以1000r/min离心10min，取出观察结果。亦可用全自动血型检测系统直接检测。（4）结果判断：阳性反应，红细胞抗原与抗体结合使红细胞发生凝集，在离心后浮在凝胶表面或胶中；阴性反应，被检红细胞无相应抗原结合，在离心后红细胞沉于微柱的底部。A孔阳性B孔阴性为A型，A孔阴性B孔阳性为B型，A孔阴性B孔阴性为O型，A孔阳性B孔阳性为AB型。见图6－1。【注意事项】1．严格按操作规程操作，认真核对标本并作好标记。2．所用试管、滴管和玻片必须清洁干净，防止溶血。3．一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。4．抗血清每次使用完后，应放回冰箱保存，以免细菌污染。5．为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。6．严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。7．观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性