ABO 血型鉴定操作规程.doc

1.0


原理


ABO血型鉴定操作规程

2.0

3.0

4.0

5.0

5.1

5.2

6.0

6.1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6

6.7

7.0

7.1

根据红细胞上和血清（或血浆）中有无A抗原和（或）B抗原及其抗体，将血型分为
A型、B型、AB型及O型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO血
型。正定型正定 是指用已知抗-A、抗-B血清来检测受检红细胞上有无相应的A抗原和（或）
B抗原；反定型反定 是指用已知A1型、B型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相
应的抗-A和（或）抗-B。

原始样品要求

5mL静脉全血。

样品容器和添加剂

真空试管，EDTA.K2抗凝/普通试管，不抗凝。
检测环境要求

温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。

所需材料和设备

设备 普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。

材料 抗-A、抗-B血清、ABO标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水
（NS）、干净空试管。

检测操作过程

将受检标本以1000g离心5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用NS
洗涤三次后，配成3%～5%红细胞悬液。

取6支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。

在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A和抗-B血清各50 L，其余管加入受检血浆/血清各
100 L。

在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者3%～5%红细胞悬液各50 L，摇匀。

在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入A1、B、O红细胞试剂各50 L，摇匀。
1000g离心15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。

根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在4℃、37℃下观察结果。

结果判断

凝集强度判断标准见表1。

表1凝集强度判断标准表

凝集强度

4+

3+

2+

1+

±

-或θ

MF

pH

H


判断标准

红细胞凝集成一大块，液体背景透明，无游离红细胞

数个大凝集块，液体背景透明，无游离红细胞

有很多小凝集块，液体背景透明，无游离红细胞

有许多很小的凝集块，肉眼可见，液体背景不透明，有游离红细胞

微小的凝集块，肉眼很难看清，需要用显微镜观察

无凝集，无溶血，全是游离红细胞

混合凝集外观，镜下可见少数红细胞凝集，而大部分是游离红细胞

部分溶血

完全溶血

7.2

ABO血型结果判断见表2：

正定型

抗-A血清血 抗-B血清血


Ac


表22血型结果判断表

反定型定

Bc Oc


自身对照


血型

＋

―

―

＋

―

＋

―

＋

―

＋

＋

―

＋

―

＋

―

―

―

―

―

―

―

―

―

A

B

O

AB

7.3

7.4

8.0

9.0

10.0

注：“＋”表示凝集或溶血；“―”表示不凝集。

正反定型不一致、ABO抗原减弱、抗-A或抗-B减弱、O细胞凝集时，排除人为操作
错误后，执行《疑难血型鉴定操作规程》进行最终确认。

根据上述判断标准，作出结论并记录在《免疫血液学检查实验记录》。

结果报告

根据实验结果，打印《免疫血液学实验报告》。报告的形式为：A型/B型/O型/AB型。

实验结果解释

实验结果为A型、B型、AB型，O型，说明受检者ABO血型分别属于A型、B型、
AB型，O型。红细胞上分别有A抗原、B抗原、皆有A抗原和B抗原、皆无A抗
原和B抗原；血浆中分别有抗-B、抗-A、抗-AB、皆无抗-A(B)。

质量控制

当受检标本与正、反定型试剂反应，凝集强度少于2+时，取标准抗-A、抗-B或A、
B、O红细胞与正、反定型试剂反应，以验证试剂效能是否下降。

11.0

11.1

11.2

11.3

11.4

11.5

11.6

11.7

11.8


注意事项

试管必须清洁、干燥，防止溶血。

加样顺序一般先加血清，再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

分型血清效价太低，抗原抗体比例不适当，可使反应不明显误判为阴性反应。

用立即试管法可能不能测出亚型（如AX），需延长作用时间。
观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于亚型、类B或cisAB的发
现。

各种原因引起的红细胞溶解，容易误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和
了相应的抗体，也会造成不凝集。

受检者红细胞上抗原位点过少（如亚