水稻不育基因筛选方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108929899A(43)申请公布日2018.12.04(21)申请号201810733937.8(22)申请日2018.07.05(71)申请人青岛袁策集团有限公司地址266000山东省青岛市李沧区金水路171号青岛国际院士港16号楼(72)发明人张国栋刘佳音米铁柱李继明丁锦燕邵晓宇(74)专利代理机构北京华仁联合知识产权代理有限公司11588代理人李冰(51)Int.Cl.C12Q1/6858(2018.01)权利要求书1页说明书7页附图2页(54)发明名称水稻不育基因筛选方法(57)摘要本申请公开了一种水稻不育基因筛选方法，包括以下步骤：G1.选取水稻不育系农垦58S与日本晴杂交组合的F2高可育和高不育单株各10～16株，苗期分别取单株的新鲜叶片，采用CTAB方法提取基因组DNA不育和可育基因池构建采用BSA法；G2.SSR标记采用水稻SSR随机引物；G3.PCR扩增；G4.获得的特异片段克隆；G5.利用筛选到的水稻光敏雄性育基因的SSR标记，对水稻材料进行SSR标记筛选。本发明为解析水稻光敏雄性不育的分子机理更好的利用水稻光敏雄性不育奠定基础。CN108929899ACN108929899A权利要求书1/1页1.一种水稻不育基因筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：G1.选取水稻不育系农垦58S与日本晴杂交组合的F2高可育和高不育单株各10～16株，苗期分别取单株的新鲜叶片，采用CTAB方法提取基因组DNA不育和可育基因池构建采用BSA法；G2.SSR标记采用水稻SSR随机引物；G3.PCR扩增；G4.获得的特异片段克隆；G5.利用筛选到的水稻光敏雄性育基因的SSR标记，对水稻材料进行SSR标记筛选。2.根据权利要求1所述水稻不育基因筛选方法，其特征在于，所述步骤G2，进一步包括：采用水稻SSR随机引物，选择32条SSR随机引物对不育和可育基因池进行标记。3.根据权利要求1所述水稻不育基因筛选方法，其特征在于，所述SSR-PCR反应体系，进一步包括：25μl反应体积，内含10×PCR反应缓冲液2.5μl、0.5UTaqDNA聚合酶、0.2mmol/LdNTPs、0.5μmol/L引物、61ng模板DNA。4.根据权利要求1所述水稻不育基因筛选方法，其特征在于，所述SSR-PCR反应体系中，退火温度为46.7℃。5.根据权利要求1所述水稻不育基因筛选方法，其特征在于，所述SSR-PCR扩增程序包括：94℃预变性5min；然后94℃变性30s，45.8℃退火45s，65℃延伸1.5min，34个循环；最后65℃延伸7min，4℃保存。6.根据权利要求1所述水稻不育基因筛选方法，其特征在于，所述步骤G4，进一步包括：采用A-T克隆法，经蓝白斑筛选，电泳检测，将阳性克隆提交测序公司测序。7.根据权利要求1所述水稻不育基因筛选方法，其特征在于，所述步骤G5，进一步包括：利用筛选到的水稻光敏雄性育基因的SSR标记，对水稻材料进行SSR标记筛选，并对筛选到的材料进行大田鉴定，从中进行获得育性稳定、综合性状优良的水稻光敏核不育系。8.根据权利要求1-7中任一项水稻不育基因筛选方法，其特征在于，所述筛选到的片断总共有该片断共有712个碱基，各个碱基数为：A：231个；C：142个；G：103个；T：236个。9.一种利用权利要求1-8中任一项所述水稻不育基因筛选方法，筛选到的SSR分子标记对水稻材料进行分子标记的方法。10.一种如权利要求1-9中任一项所述方法在光敏雄性不育相关基因筛选中的应用。2CN108929899A说明书1/7页水稻不育基因筛选方法技术领域[0001]本发明涉及分子生物学遗传育种技术领域，特别涉及一种水稻不育基因筛选方法。背景技术[0002]水稻是我国单产最高、播种面积最大的粮食作物，杂交水稻被称为我国“第五大发明”，水稻杂种优势利用是构建我国粮食安全生产体系的核心技术之一。“三系法”和“两系法”是当前水稻杂种优势利用的主要途径。但由于亲本利用资源和制种安全性的原因，限制了这两种途径全面开发水稻杂种优势的潜力。[0003]水稻是世界三大粮食作物之一，全球的国家均有种植，全世界一半以上人口(包括几乎整个东亚和东南亚人口)以水稻为主粮，栽培面积约亿公顷，产量在亿吨以上。水稻是我国种植面积最大、单产最高、总产最多的粮食作物，我国水稻播种面积约占世界水稻播种面积的，居世界第二位；稻谷年平均总产量约占世界稻谷总产量的，居世界第一位。[0004]中国也是杂交水稻的发源地和第一个将杂交水稻大面积应用于生产的国家，生产实践证明，在相同条件下，杂交水稻一般比普通良种增产左右。目前，我国杂交水稻种植面积占全国稻作面积的以上，产量占稻谷总产量的。以提高农作物单