玉米赤霉烯酮荧光定量检测试纸条性能评估测试.pdf

玉米赤霉烯酮荧光定量检测试纸条性能评估测试摘要：对上海飞测生物科技有限公司研发生产的玉米赤霉烯酮荧光定量检测试纸条在粮食谷物饲料中的检测性能进行了评估。该产品的最低检出限（LOD）为0.29μg/kg，最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg，线性范围为1.00-50.00μg/kg，线性范围内的添加回收率为92.89%~121.07%，3次重复的变异系数在14.56%以内。与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%。该产品具有操作简便、灵敏准确、快速定量、重现性好等优点，适合用于对粮食谷物饲料中玉米赤霉烯酮的进行快速定量测定。关键词：玉米赤霉烯酮检测试纸条；荧光定量免疫层析；玉米赤霉烯酮；粮食谷物饲料玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)又称F-2毒素，主要由禾谷镰刀菌产生。它首先从有赤霉病的玉米中分离得到，是一种酚的二羟基苯酸的内酯结构，分子式为C18H22O5。玉米赤霉烯酮常污染玉米小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物。玉米赤霉烯酮具有雌激素的作用，其强度为雌激素的十分之一，可造成家禽和家畜的雌激素水平提高。目前发现，猪对此毒素较为敏感。玉米赤霉烯酮作用的靶器官主要是雌性动物的生殖系统，同时对雄性动物也有一定的影响，可使家畜，家禽和实验小鼠产生雌性激素亢进症。妊娠期的动物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产、死胎和畸胎。由于玉米赤霉烯酮具有以上危害，已经被联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）确定为最危险的自然发生的食品污染物之一。我国国家标准GB2761-2011（食品中真菌毒素限量）中对谷物及其制品中的ZEN最高限量要求为60μg/kg。GB13078.2-2006《饲料卫生标准饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允许量》，不同种类的饲料中玉米赤霉烯酮的最高限量标准为500μg/kg目前，国标法测定玉米赤霉烯酮采用HPLC法，需要大型的仪器设备，价格昂贵，操作过程复杂、时间较长，且无法在现场和基础小型实验室使用。除此之外，也有采用玉米赤霉烯酮酶联免疫试剂盒或胶体金快速检测试纸条用于大量样品的筛查，操作简便，检测快速，成本也较低，但准确性和重复性较差，容易造成假阳性或者假阴性。因此，急需一种既简便快速，又能准确定量的检测方法，荧光定量免疫层析正好可以满足这种需求。本文通过对多种粮食谷物饲料样品的实测，验证了上海飞测生物开发的玉米赤霉烯酮荧光定量快速检测试纸条的技术性能。1实验材料和方法1.1试剂和材料除注明外，均为分析纯，试验用水均为UP水。玉米赤霉烯酮荧光荧光定量检测试纸条（由包被有荧光微球标记玉米赤霉烯酮抗体的乳胶垫、喷涂有玉米赤霉烯酮抗原的检测线和喷涂有羊抗鸡二抗的控制线的NC膜、样品垫及吸收垫组成）、样品提取液、样品稀释液、标准曲线ID卡及标准曲线条形码均由上海飞测生物科技有限公司提供。玉米赤霉烯酮及其他真菌毒素的标准品：购自Sigma公司；大米、玉米、小麦、面粉等样品从超市购得或从企业取样。麸皮，小麦、面粉等饲料样品从饲料厂和企业取样。1.2仪器与设备FD-100型荧光免疫定量分析仪和FD-5000型试纸条恒温孵育器，上海飞测生物科技有限公司提供；低速离心机，上海卢湘仪离心机仪器有限公司；漩涡振荡器，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；电子天平：Sartorius；1.3试验方法1.3.1样品的前处理取具有代表性的待测样品500g，用小型粉碎机粉碎1min后过20目筛，收集过筛的细小样品。称取1.0±0.02g过筛的样品于10mL离心管中，加入5mL提取液，用漩涡混匀仪震荡5min(或者摇床振荡10min）后，4000RPM离心1min，取上清。1.3.2检测过程取50μL离心上清液加入500μL样品稀释液中，用漩涡混匀器混匀3-5s，然后取100μL加入到玉米赤霉烯酮荧光定量检测试纸条的加样孔中，置于37℃恒温孵育器中温育10min后，将试纸条插入荧光免疫定量分析仪中读数，即为样品的实际检测浓度。当检测值大于5000μg/kg时，可用提取液将离心上清液稀释5倍后再进行检测，所得读数值乘以对应的稀释倍数即为最终的检验结果。2检测结果分析2.1线性范围与检出限在样品提取液中，分别添加10.00μg/kg、25.00μg/kg、50.00μg/kg、100.00μg/kg、250.00μg/kg、500.00μg/kg、1000μg/kg的玉米赤霉烯酮标准品，用上海飞测生物玉米赤霉烯酮荧光定量检测试纸条每个样品检测3次，以添加浓度为为纵坐标，以荧光定量检测试纸条的检测结果为横坐标，拟合曲线并计算线性相关系数，结果如下：图1玉米赤霉烯酮标准品添加与荧光定量试纸条检测值的线性关系计算得出小麦的线性范围：10.00～1000.00μg/kg（7点），回归方程:y=1.107x+0.011，相关系数，R²=0