CATSPER4基因第三外显子的SNP作为猪精液品质性状的遗传标记.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109837347A(43)申请公布日2019.06.04(21)申请号201910002484.6(22)申请日2019.01.02(71)申请人华中农业大学地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号(72)发明人李凤娥赵丽萍宋慧彬冯越陈大可(74)专利代理机构武汉宇晨专利事务所42001代理人张红兵(51)Int.Cl.C12Q1/6888(2018.01)C12Q1/683(2018.01)C12Q1/686(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表2页附图1页(54)发明名称CATSPER4基因第三外显子的SNP作为猪精液品质性状的遗传标记(57)摘要本发明属于猪遗传标记制备与应用技术领域，涉及CATSPER4基因第三外显子的SNP作为猪精液品质性状的遗传标记。该遗传标记从猪CATSPER4基因外显子3上克隆得到，其核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。公开了猪CATSPER4基因外显子3上SNP位点及其SNP分型的检测方法，CATSPER4基因外显子3上存在一个等位基因的突变，该突变引起AlwNI-RFLP多态性。本发明筛选步骤包括：从猪血液中提取基因组DNA，从测序结果里寻找SNP位点，确定该SNP位点的内切酶，通过设计引物，PCR扩增，单核苷酸多态性检测，对基因型与精液品质性状间进行相关性分析。本发明筛选的标记可在猪标记辅助选择中应用。CN109837347ACN109837347A权利要求书1/1页1.一种与猪精液品质性状关联的遗传标记，其特征在于，所述的遗传标记的核苷酸序列如下所示：GCAATGACCACAGCGAAGACCTCCCAGCAGTGACCCACTTTAGTGGCCACTTGGGTAGTGACCGCTACGCTGATGCCCCCATTCCATGGTCCCCTCTCAGGCAACTTCTTCCCACAGGAGTGGCCCCCAAGAGTCCCTATTCACTGAGAGCAAACTTCCAGGCAGAGGCCTCCTACAGTGACACCTGCCTGAAGGAAGTCCCCCACCCTCTCCCAGGATACCTGGGACATGCAGGAGTTCATCACTCGCATGTATGTCAAGCAGCTGCTCCGACACCCGGCCTTCCAGCTGCTRCTGGCCACGCTGCTGGTGGTCAATGCCATCACCATCGCTCTCCGCACCAACTCCGCCCTTGGCCAGGTGGGACTTCAGCCTGATTTCCGTCCCCACTGATCTAACGGGCCTGAGCA，上述序列中的294位的碱基R是G或T，该突变导致AlwNI-RFLP多态性。2.扩增权利要求1所述的遗传标记的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如序列表SEQIDNO：2和SEQIDNO：3所示。3.一种筛选猪精液品质性状关联的遗传标记的方法，其特征在于，所述的方法按以下步骤：从猪血液中提取基因组DNA，根据突变位点在猪CATSPER4基因序列上的位置，设计特异引物对，所述特异性引物对的核苷酸序列如序列表SEQIDNO：2和SEQIDNO：3所示，利用该特异性引物对在猪基因组DNA中进行PCR扩增，利用所得的PCR扩增片段进行AlwNI酶切分型及检测。4.权利要求1所述遗传标记在在猪精液品质性状标记辅助选择中的应用。5.权利要求2所述的引物对在猪精液品质性状标记辅助选择中的应用。2CN109837347A说明书1/5页CATSPER4基因第三外显子的SNP作为猪精液品质性状的遗传标记技术领域[0001]本发明涉及猪遗传标记制备技术领域，具体涉及一种CATSPER4基因第三外显子的SNP作为猪精液品质性状的遗传标记及应用，它包括猪CATSPER4基因突变位点的检测方法与应用。背景技术[0002]公猪的繁殖性能对猪群规模和猪场效益具有重要作用，一般通过鉴定精液品质来衡量公猪的繁殖性能。精液品质的指标包括精子浓度、精子活力、畸形精子率和精子形态以及动力学参数和DNA完整性等。精液品质主要是由遗传作用和环境作用两个因素决定，环境因素可以进行人为的控制和改善，但只有不断改良遗传作用才是提高精液品质和公猪的繁殖性能的关键。公猪繁殖性状遗传力低，使得常规的选择方法很难在短期内获得较大进展。随着分子生物学和分子遗传学的快速发展，标记辅助选择成为了提高公猪精液质量的有效方法。[0003]CATSPER4基因是精子特异性阳离子通道家族4，在梅山公猪睾丸组织中的发育性表达分析表明了其在初生时启动，受到发育阶段的调控，具有阶段特异性。有研究表明CATSPER4极有可能参与受精过程，因为其mRNA在成熟的精子细胞中表达，且