一种高产漆酶的疣孢漆斑菌及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109868224A(43)申请公布日2019.06.11(21)申请号201910105654.3C12R1/645(2006.01)(22)申请日2019.02.01(83)生物保藏信息CCTCCNO:M20188002018.11.19(71)申请人吉林农业大学地址130118吉林省长春市新城大街2888号(72)发明人孙旸陈光苟泽昌苏瑛杰王刚陈欢于潇潇(74)专利代理机构重庆晶智汇知识产权代理事务所(普通合伙)50229代理人李靖(51)Int.Cl.C12N1/14(2006.01)C12N9/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称一种高产漆酶的疣孢漆斑菌及应用(57)摘要一种疣孢漆斑菌（Myrotheciumverrucaria）突变菌株3H6，保藏号为CCTCCNO:M2018800。它为高产漆酶菌株，其在基础发酵培养基中、通过摇瓶培养方式所产漆酶的酶活可高达3408.69U/L，比现有疣孢漆斑菌菌株提高了55.6%。高产漆酶的培养物，它包括以单宁酸处理后的玉米秸秆为唯一碳源，菌种采用疣孢漆斑菌（Myrotheciumverrucaria）3H6。采用本发明产漆酶培养物，通过摇瓶培养方式所产漆酶的酶活显著提高、可高达7025.54U/L。CN109868224ACN109868224A权利要求书1/1页1.一种疣孢漆斑菌（Myrotheciumverrucaria）突变菌株3H6，保藏号为CCTCCNO:M2018800。2.一种高产漆酶的培养物，其特征在于：它包括以单宁酸处理后的玉米秸秆为唯一碳源，菌种采用疣孢漆斑菌（Myrotheciumverrucaria）3H6。3.如权利要求2所述的培养物，其特征在于：所述单宁酸的浓度为1-15g/L，更优选单宁酸的浓度为1g/L。4.如权利要求3所述的培养物，其特征在于：所述玉米秸秆与单宁酸的固液比为1:8-24、以克/mL对应单位；优选的，玉米秸秆与单宁酸的固液比为1:20。5.如权利要求3或4所述的培养物，其特征在于：所述单宁酸浸泡玉米秸秆的温度为90-130℃、时间为50-65min。6.如权利要求5所述的培养物，其特征在于：所述单宁酸浸泡玉米秸秆的温度为110℃、时间为60min。7.如权利要求3-5任一项所述的培养物，其特征在于：它由单宁酸处理后的玉米秸秆为碳源,土豆、蛋白胨、酵母粉,Tween80、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O组成。8.如权利要求7所述的培养物，其特征在于：配方为土豆20g/L,单宁酸浸泡处理后的玉米秸秆3.6g/L,蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,Tween801g/L,KH2PO41.5g/L,MgSO4·7H2O1.5g/L,CaCl2·2H2O0.1g/L。9.一种漆酶的生产方法，其特征在于，按如下步骤：（1）、将粉碎的玉米秸秆浸泡在单宁酸溶液中；单宁酸的浓度为1-15g/L，玉米秸秆与单宁酸的固液比为1:8-24、以克/mL对应单位，浸泡温度为90-130℃、时间为50-65min；（2）、以上反应结束、将玉米秸秆粉末抽滤至含水量50-60%，然后烘干至含水量在10-13%；（3）、将步骤（2）所得玉米秸秆粉末作为唯一碳源制作发酵培养基，所述发酵培养基配方为：单宁酸处理后的玉米秸秆为碳源,土豆、蛋白胨、酵母粉,Tween80、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O，菌种采用疣孢漆斑菌3H6菌株；（4）、摇瓶发酵培养：160r/min、温度30℃、时间96h；（5）、将上述发酵液离心，得到上清液中的粗酶，在粗酶液中用(NH4)2SO4溶液在4℃内分步沉淀蛋白质；用50kDa分子量截留的超滤浓缩器将漆酶富集、浓缩和脱盐制得，并在4℃保存。2CN109868224A说明书1/5页一种高产漆酶的疣孢漆斑菌及应用技术领域[0001]本发明涉及应用微生物技术领域，具体涉及一种疣孢漆斑菌新菌株及其应用。背景技术[0002]漆酶(EC1.10.3.2，Lac)，简称β-双酚：二氧化还原酶，是一种含铜氧化酶，属于多效氧化酶超家族。漆酶可以通过生成不稳定的自由基和氧四电子还原来催化多种化合物的氧化生成水。漆酶已广泛应用于合成有机化学、食品、纺织工业、污水处理、脱木素和漂白等领域。它们可以从细菌、真菌和植物中得到，由于具有热稳定性和广泛的催化作用，真菌在漆酶的生产中起着主导作用。[0003]漆酶在环境领域的潜在效益有待进一步探讨，通过改变培养基条件、紫外线诱变、常温常压离子体诱变、定向进化等途径提高酶的活性，而漆酶的生产受到低产率和高成本的限制。如何提高活性、大范围稳定漆酶的产量还有待进一步研究。