用于樟子松离体胚干化处理的装置和培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113575418A(43)申请公布日2021.11.02(21)申请号202110944465.2(22)申请日2021.08.17(71)申请人青岛农业大学地址266109山东省青岛市城阳区长城路700号(72)发明人孟鹏刘静(74)专利代理机构北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙)11531代理人盛君梅(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图4页(54)发明名称用于樟子松离体胚干化处理的装置和培养方法(57)摘要本发明提供一种用于樟子松离体胚干化处理的装置，包括：顶部开口的储水容器、顶部开口的离体胚容器和浸水层，所述离体胚容器的底面设置有打孔区，所述打孔区设置有若干紧密排布的细孔；所述离体胚容器放置于所述储水容器内，所述离体胚容器底面与储水容器的底面的内表面之间设置所述浸水层，所述浸水层与离体胚容器底面接触的区域包含所述打孔区；使用时所述储水容器的顶部由封口膜密封。本发明还提供了基于该干化装置对樟子松离体胚处理的方法及促进其萌发生根的方法。本发明首次提供了对樟子松离体胚进行干化处理并进一步促进其萌发生根的技术方案，有利于促进樟子松的组培研究进展。CN113575418ACN113575418A权利要求书1/1页1.一种用于樟子松离体胚干化处理的装置，其特征在于，包括：顶部开口的储水容器、顶部开口的离体胚容器和浸水层，所述离体胚容器的底面设置有打孔区，所述打孔区设置有若干紧密排布的细孔；所述离体胚容器放置于所述储水容器内，所述离体胚容器底面与储水容器的底面的内表面之间设置所述浸水层，所述浸水层与离体胚容器底面接触的区域包含所述打孔区；使用时所述储水容器的顶部由封口膜密封；所述浸水层由玻璃微纤维、涤纶树脂或聚丙烯制成。2.如权利要求1所述的装置，其特征在于，所述细孔的孔径为0.5‑1.5mm。3.如权利要求1所述的装置，其特征在于，所述浸水层和离体胚容器底面之间还设置有微孔滤膜；优选地，所述微孔滤膜孔径为0.4‑2.0μm。4.如权利要求1所述的装置，其特征在于，所述储水容器直径120‑150mm，高15‑25mm；所述离体胚容器直径90‑120mm，高12‑20mm。5.如权利要求1所述的装置，其特征在于，所述储水容器为玻璃材质；所述离体胚容器为玻璃或聚苯乙烯材质。6.一种樟子松离体胚干化处理的方法，其特征在于，包括：1)于无菌环境下，向灭菌处理的储水容器中注入少量无菌水，依次将浸水层和离体胚容器置入储水容器中，然后将樟子松离体胚放置于离体胚容器的打孔区；2)以封口膜将储水容器的顶部密封；3)将密封后的储水容器置于光强为11000‑13000Lux的全光谱LED灯侧向光照下进行干化处理8‑14天。7.如权利要求6所述的樟子松离体胚干化处理的方法，其特征在于，还包括：在浸水层与离体胚容器之间放置有微孔滤膜。8.如权利要求6所述的樟子松离体胚干化处理的方法，其特征在于，步骤1)所述樟子松离体胚的前处理是通过包括下述步骤的方法实现的：以75％酒精对离体胚进行灭菌处理5‑10s，然后以蒸馏水冲洗10‑20s，再以吸水纸将离体胚上的水分去除。9.如权利要求6所述的樟子松离体胚干化处理的方法，其特征在于，步骤1)中所述樟子松离体胚的之间间距不小于5mm。10.一种促进樟子松离体胚萌发的方法，其特征在于，包括：1)将经权利要求6‑9中任一项所述的方法干化处理后的樟子松离体胚置于1/4MS培养基上培养45天，至获得生长出针叶的培养材料；2)将所述生长出针叶的培养材料转移至萌发培养基中培养至其生根，所述萌发培养基由1/4MS培养基加入IBA1.0mg/L和0.1％AC配制而成；优选地在萌发培养基中培养60天。2CN113575418A说明书1/5页用于樟子松离体胚干化处理的装置和培养方法技术领域[0001]本发明涉及木本植物组织培养技术领域，具体涉及一种用于樟子松离体胚干化生根的装置和方法。背景技术[0002]在当今针叶树良种扩繁过程中，往往在扦插和嫁接难以成功的时候，选择以胚为外植体的组织培养，尤其采用体细胞胚胎发生技术。这些技术在胚上产生大量幼芽或在愈伤组织上产生大量幼胚，而这些离体幼胚生根困难往往成为育苗技术瓶颈。这主要是由于没有胚乳提供营养，影响了离体胚的正常发育起始和正向进展及代谢水平，其次是离体胚中存在较多内含生根抑制物质。研究表明为这些离体胚提供适宜的温湿度和光照条件，有利于诱导这些离体胚正向的代谢物质积累及各类抑制物质的转化，从而产生有利于生长发育的内含物质。比如王军辉等通过弱光“滤纸容器法”使云杉高频率生根，具体做法是将离体胚放置在垫有2层滤纸的塑料培养皿(40mm×12mm)中，随后将培养皿放置在更大