桂花幼胚的离体培养及生根诱导.docx

桂花幼胚的离体培养及生根诱导摘要：对3个桂花品种大花金桂、籽银桂、籽丹桂进行幼胚的离体培养研究了不同消毒时间、基本培养基及生长调节剂组合对离体幼胚萌发的影响以及不同培养条件和培养基配方对萌发苗生根的影响。结果表明适合幼胚萌发的适宜培养基大花金桂为：B5+1mg/L6-BA+3mg/LGA；籽银桂：B5+2mg/L6-BA+2mg/LGA；籽丹桂：B5+1.5mg/L6-BA+1mg/LGA。生根适宜培养基为：1/2MS+2mg/LNAA。关键词：桂花；幼胚；离体培养；萌发；生根中图分类号：S685.130.4+.3文献标识号：A文章编号：1001-4942（2013）03-0007-04桂花（Osmanthusfragrans）是中国十大传统名花其花期正值我国传统佳节中秋节花时香闻数里有“独占三秋压群芳”之誉在庭院绿化和香料生产中一直保持着重要的地位和影响。桂花在我国的栽培历史悠久形成了丰富的品种和类型。大致分为金桂、银桂、丹桂和四季桂4个品种群157个品种[1～2]。桂花种子有后熟作用[78]采收后需要在湿润条件下保存到第2年才能萌发在贮藏的过程中腐烂率高达50%以上成为桂花育种的限制因素之一。利用组织培养技术可以促进桂花幼胚的提前萌发但目前研究较少[610]萌发率相对较低。试验针对不同桂花品种的幼胚进行组织培养促使幼胚提前萌发并提高萌发率在短时间内产生大量无菌试管苗为桂花再生体系的建立奠定了试验基础。1材料与方法1.1材料及外植体处理试验材料：取自武汉生长健壮的成年乔木桂花植株。桂花品种：大花金桂、籽银桂、籽丹桂。2011年3月初取未完全成熟的桂花果实。去除肉质的外果皮、中果皮用自来水冲洗1～2h在超净工作台上剥除内果皮用75%乙醇浸泡30s无菌水漂洗3次转入0.1%升汞溶液中消毒消毒时间分别为3、5、6、8、10min无菌水漂洗3～5次剥取幼胚接种到诱导培养基上。1.2幼胚萌发培养幼胚萌发培养基：MS及B5培养基添加不同浓度6-BA及GA。每瓶接种幼胚5个3瓶为1个处理每处理重复3次。观察幼胚萌发的动态变化35天时统计萌发率进行长势分析。1.3生长调节剂组合对离体幼胚萌发的影响以B5作为基本培养基配合不同浓度的6-BA和GA进行2因素4水平的正交试验设计共12种组合（表1）筛选大花金桂、籽银桂、籽丹桂幼胚萌发的适宜培养基。分别在40天时统计萌发率并观察长势。1.4生根培养待萌发的幼苗长出2～3对真叶时进行生根诱导。生根诱导培养基：1/2MS设置不同浓度NAA。每个组合接种6瓶每瓶3个材料。1.5培养条件培养基pH=5.86g/L琼脂30g/L蔗糖。培养温度25℃光照14h/d光照强度1500～2000lx。2结果与分析2.1不同消毒时间对幼胚萌发的影响预试验过程中将幼胚接种在3mg/L6-BA的B5培养基上设计了5个消毒时间梯度30天时统计幼胚萌发率、褐化率和污染率。结果（表2）表明0.1%升汞消毒大于3min即可达到良好的消毒效果消毒时间过长（超过5min）幼胚子叶容易褐化间接导致材料死亡从而降低幼胚的萌发率。综合考虑升汞消毒时间在3～5min为最佳。2.2不同基本培养基对幼胚萌发的影响从表3可以看出两种基本培养基均可诱导桂花幼胚萌发当6-BA为1.5mg/L、无GA添加时在B5培养基上幼胚的萌发率可高达80%35天时平均能长出6对真叶而在MS培养基中其萌发率仅为55.6%且诱导苗生长缓慢。综合考虑萌发率及幼苗的生长势诱导桂花幼胚萌发较好的基本培养基为B5。表3还表明单独使用6-BA或者GA均能诱导幼胚萌发但幼胚培养的萌发率均未超过80%且幼苗生长较缓慢真叶较少长势不够好。2.3不同生长调节剂对不同品种桂花幼胚萌发的影响正交试验结果（图1、图2）表明多种培养基配方均可诱导桂花幼胚萌发但萌发率与生长势存在较大差异。在添加2mg/LGA的培养基上籽银桂的萌发率可达到100%大花金桂和籽丹桂的萌发频率较低均未超过80%（图1）。综合萌发率、真叶数量、长势、株高（图2）等情况适合不同品种幼胚萌发的培养基为大花金桂：B5+6-BA（1mg/L）+GA（3mg/L）；籽银桂：B5+6-BA（2mg/L）+GA（2mg/L）；籽丹桂：B5+6-BA（1.5mg/L）+GA（1mg/L）。2.4不同生根培养基组合对桂花幼胚萌发苗生根的影响当无菌苗长出2～3对真叶、