鬼臼毒素衍生物ZM16抗肿瘤多药耐药作用及其作用机制研究.pdf

河北医科大学硕士学位论文鬼臼毒素衍生物ZM-16抗肿瘤多药耐药作用及其作用机制研究姓名：杨再鑫申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：雷志勇;陈虹20090301度．州、对／赴鸓．表达的影响初鬼臼毒素衍生物．抗肿瘤多药耐药作用及其作用机制研究摘要目的：研究新鬼臼毒素衍生物．体外抗人源肿瘤细胞多药耐药作用及其诱导耐药肿瘤细胞凋亡的作用初步探讨一抗肿瘤多药耐药作用机制为抗肿瘤新药开发、研制提供理论基础。方法：ê蚐法检分别测．訦、、、、和／赴さ囊种苹性。訩疉和为研究对象采用染色技术、／荧光双染技术、琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞技术观察了．诱导／蚄赴亡与作用效果。法检测不同浓度一、对／赴鹥、一．等凋亡相关基因以及猯、鸵┫喙鼗虻膍表达的影响。産ê兔庖呦赴Хḿ觳獠煌步分析了一抗肿瘤多药耐药的机制。す夤簿劢辜觳不同浓度．、对细胞微管的影响。结果：笛榉⑾諾远嘀痔谥琢鱿赴较强的抑制作用为４覵结果可看出：一对人红白血病细胞及阿霉素诱导的多药耐药株疉幸种谱饔茫珿直鹞#．矛。通过对／赴で叩墓鄄欤⑾植煌ǘ鹊中文摘要尽结果显示拧．能够诱导／蚻④细胞凋亡。不同浓．对／赴纳び忻飨缘囊种谱饔茫⑶揖哂显著的量效关系。度的一、作用于／赴后分别用染液和荧光染料疨韵赴腥旧ǎ者将细胞核染成粉红色胞浆染成蓝紫色。未加药组的细胞核染色均一、结构完整、核浆比值大；给药组细胞呈现核膜皱缩核边集、碎裂。经荧光双染后的细胞在紫外光激发下发蓝色和红色荧光．可使细胞核染色质发生聚集、碎裂细胞膜不断出芽、脱落细胞变成数个大小不等的凋亡小体并且随着一浓度的加大镜下具有这种细胞形态变化的细胞数量愈加明显凋亡细胞的比例逐渐增加。在旱缬臼笛橹校貌煌ǘ鹊腪直鹱饔糜细胞崛进行琼脂糖凝胶电泳可呈现典型的“葑友蓖计住Ｓτ昧魇较赴墙兄琢鱿赴蛲率测定可见经不同浓度的．、作用于／赴后出现一个明显“亚二倍体峰”即凋亡峰且凋亡细胞的比例随着一浓度的升高而增加呈一定的剂量依赖性。貌煌ǘ鹊腪直鹱饔糜贙疉细胞矛淌奔涞图亮靠墒瓜赴芷谧瓒显赟期延长作用时间及增加给药浓度细胞被阻滞于／凇—能升高、的水平同时降乇、的水平与对照组相比差异有统计学意义但对饔貌幻飨浴中文摘要尽煌ǘ鹊腪饔糜贙疉细胞琖産懊庖呦赴Ы峁允綵上碌猤泶铮页室欢ǖ募亮恳览敌裕琖—结果中高剂量组与阴性对照组相癙．。煌ǘ鹊腪饔糜贙赴后通过微管免疫荧光法观察一对微管以及细胞核形态的影响可见对照组的细胞微管形态结构完整网状结构清晰细胞核结构完好；而用一处理后微管结构受到一定程度的破坏数量减少呈断片状细胞核完整性受到一定影响；高剂量腪咕蟛糠治⒐结构破坏微管不再成束仅在核周残留少量弥散点状不规则荧光细胞核内部结构无法呈现。阳性对照药鬼臼毒素砗蟮南赴⒐懿辉俪墒氏指飨缘牡阕床还则荧光。高剂量一处理后的细胞微管形态变化与鬼臼毒素处理后结果相似。结论：．结构新颖、体外抑瘤效果明显而且对多药耐药肿瘤细胞也有明显抑制作用；能将肿瘤细胞生长周期阻断在／冢蓖ü皀、．．及猤鞍姿剑种葡赴⒐芫酆希跋旆锤体形成来阻止细胞有丝分裂从而诱导耐药肿瘤细胞的凋亡。因此．有望成为一个有自主知识产权的新型抗肿瘤多药耐药化合物。关键词：鬼臼毒素衍生物；抗多药耐药；细胞周期；凋亡；微管中文摘要。．——一英文摘要：瑃．·