用于防治黄瓜枯萎病的芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114456966A(43)申请公布日2022.05.10(21)申请号202011598020.5A01P21/00(2006.01)(22)申请日2020.12.29C12R1/125(2006.01)C12R1/07(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNO.211232020.11.06CGMCCNO.211242020.11.06(71)申请人中国农业大学地址100193北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人李洁明任莉李季吕贻忠(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002专利代理师张璐(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)A01N63/22(2020.01)A01P3/00(2006.01)权利要求书2页说明书6页(54)发明名称用于防治黄瓜枯萎病的芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及微生物制剂领域，具体涉及用于防治黄瓜枯萎病的芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用。所述的芽孢杆菌菌剂包括枯草芽孢杆菌ZR‑2，其保藏编号为CGMCCNO.21124；和，解淀粉芽孢杆菌ZR‑3，其保藏编号为CGMCCNO.21123。本发明中的芽孢杆菌菌剂可用于防治黄瓜枯萎病，能够防治黄瓜病害，同时，还可以促进黄瓜种子萌发和幼苗生长，有利于黄瓜增产增收。CN114456966ACN114456966A权利要求书1/2页1.枯草芽孢杆菌ZR‑2，其保藏编号为CGMCCNO.21124。2.解淀粉芽孢杆菌ZR‑3，其保藏编号为CGMCCNO.21123。3.一种芽孢杆菌菌剂，其特征在于，包括：枯草芽孢杆菌ZR‑2，其保藏编号为CGMCCNO.21124；和，解淀粉芽孢杆菌ZR‑3，其保藏编号为CGMCCNO.21123。4.根据权利要求3所述的芽孢杆菌菌剂，其特征在于，包括：枯草芽孢杆菌ZR‑21.5×108‑2.0×1010cfu/mL；解淀粉芽孢杆菌ZR‑33.5×108‑2.0×1010cfu/mL；总菌数为2×1010‑4×1010cfu/mL；优选由如下组分组成：枯草芽孢杆菌ZR‑27.5×109‑1.0×1010cfu/mL；解淀粉芽孢杆菌ZR‑32.5×109‑0.5×1010cfu/mL；总菌数为1.0×1010‑1.5×1010cfu/mL。5.权利要求3或4所述的芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，包括：将枯草芽孢杆菌ZR‑2和解淀粉芽孢杆菌ZR‑3进行高密度混合发酵培养，获得芽孢杆菌菌剂。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在所述高密度混合发酵培养中所使用的液体培养基为如下质量百分比的组分：玉米糖浆粉10‑20％、豆饼粉4‑8％、蛋白胨1‑5％、磷酸氢二钾0.8‑1.2‰，余量为水。7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，在所述高密度混合发酵培养中，在起始0‑24小时内，进行间隔通气，保持在有氧条件下发酵，通气量1：0.8‑1.5，控制发酵溶解氧为10‑20％；搅拌转速100‑200r/min，搅拌间隔时间1‑2小时，搅拌1‑3分钟；温度为25‑35℃。8.根据权利要求5‑7中任一项所述的制备方法，其特征在于，在进行所述高密度混合发酵培养前，先将枯草芽孢杆菌ZR‑2和解淀粉芽孢杆菌ZR‑3分别进行如下培养：1).斜面培养：将枯草芽孢杆菌ZR‑2、解淀粉芽孢杆菌ZR‑3两种原始菌种在无菌条件下分别接种于固体培养基上，25℃‑35℃条件下，培养1‑3天，使菌种活化；2).一级种子培养：将步骤1)活化的菌种在无菌条件下分别接种于液体培养基，25℃‑35℃条件下，摇床培养1‑2天，制得一级种子；3).二级种子培养：按液体培养基的体积比为5‑10％的接种量，将一级种子分别接种于发酵罐中，25℃‑35℃条件下，搅拌速度为100‑200r/min，通气量为1：0.8‑2.0，培养1‑2天，制得二级种子；优选在进行高密度混合发酵培养时，按液体培养基的体积比为5‑10％的接种量，将二级种子接种于发酵罐中。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，在步骤2)中，摇床培养的转速为100‑200r/min，在OD600值为3.0‑4.0时停止培养；和/或，在步骤1)中所述固体培养基为LB培养基；在步骤2)、步骤3)中所用的液体培养基LB培养基。10.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌ZR‑2、或权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌ZR‑3、或2CN114456966A权利要求书2/2页权利要求3或4所述的芽孢杆菌菌剂在以下任一方面的应用：(1)防治黄瓜枯萎病；(2)促进黄瓜种子萌发；(3)促进黄瓜幼苗生长。3CN114456966A说明书1/6页用于防治黄瓜枯萎病的芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用技术领域[0001]