一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114686552A(43)申请公布日2022.07.01(21)申请号202210340676.X(22)申请日2022.04.02(71)申请人吉林农业大学地址130118吉林省长春市新城大街2888号(72)发明人张斯童牛光有张娜高大明李艳丽王刚陈欢陈光(74)专利代理机构重庆晶智汇知识产权代理事务所(普通合伙)50229专利代理师李靖(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/113(2006.01)A23L33/165(2016.01)权利要求书2页说明书8页附图5页(54)发明名称一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法(57)摘要一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，是以油茶籽粕为原料提取油茶籽粕蛋白，采用风味蛋白酶和胰蛋白酶依次水解，制备出分子量＜3KDa的油茶籽粕多肽，配制成多肽溶液并依次进行水浴和超声处理，然后加入硫酸锌进行螯合，螯合结束后洗涤、取沉淀进行干燥。本发明制备的油茶籽粕多肽锌螯合物中含有17种氨基酸，其中具有7种必须氨基酸，油茶籽粕多肽与锌离子螯合率达到58.79%；具有优异的抗氧化能力，清除DPPH自由基能力达到97.4%，具有较好的生物活性，油茶籽粕多肽锌螯合物中锌离子释放率达到78.23%，透析率达到60.51%，具有较好的生物利用率。CN114686552ACN114686552A权利要求书1/2页1.一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：以油茶籽粕为原料提取油茶籽粕蛋白，去除茶皂素后，采用风味蛋白酶和胰蛋白酶依次水解，制备出分子量＜3KDa的油茶籽粕多肽，配制成多肽溶液并依次进行水浴和超声处理，然后加入硫酸锌进行螯合，螯合结束后洗涤、取沉淀进行干燥。2.如权利要求1所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述水解是将油茶籽粕蛋白配制成浓度为4.5‑5g/mL的溶液，调节pH为7，加入风味蛋白酶在45℃下进行水解2‑3h，然后灭酶，调节pH后，加入胰蛋白酶，在50℃下继续水解0.5‑1h，加入的蛋白酶总量占底物质量的5‑7%，其中风味蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1‑2:1。3.如权利要求1或2所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述多肽溶液的浓度为20mg/mL，硫酸锌溶液的浓度为20mg/mL，多肽溶液和硫酸锌溶液的体积比为5‑6:1，pH为7，螯合温度为55‑65℃，螯合时间为80‑100min。4.如权利要求1‑3任一项所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述提取蛋白是将预处理油茶籽粕粉末按照料液比为1g:25‑30mL加入NaOH溶液中，保持pH为9.3‑10，在70℃下提取45‑60min，然后离心，取上清液采用盐酸调节pH至4‑4.5，再次离心得沉淀，冷冻干燥。5.如权利要求4所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述预处理是将油茶籽粕碎后，用正己烷浸提24h进行脱脂，然后采用体积浓度为75%的乙醇浸提5次，每次1h，再进行干燥，粉碎过100目筛得油茶籽粕粉末。6.如权利要求1‑5任一项所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述水浴是将多肽溶液pH调节至7，然后在45℃下进行水浴30‑40min。7.如权利要求6所述的一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于：所述超声处理的超声功率为100%，超声处理时间为15min。8.一种油茶籽粕多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于，按如下步骤进行：步骤1：提取油茶籽粕蛋白（1）预处理：将油茶籽粕碎后，用正己烷浸提24h进行脱脂，然后采用体积浓度为75%的乙醇浸提5次，每次1h，再进行干燥，粉碎过100目筛得油茶籽粕粉末；（2）：将油茶籽粕粉末加入pH为9.3‑10的氢氧化钠溶液中，在70℃下水浴提取45‑60min，然后在8000rpm下离心20min，取上清液加入1mol/L的盐酸溶液，调节pH至4‑4.5，再在8000rpm下离心20min，取沉淀进行冷却干燥，得油茶籽粕蛋白，油茶籽粕和氢氧化钠溶液的用量比为1g：25‑30mL；步骤2：水解制备多肽（1）使用NKA‑Ⅱ树脂对油茶籽粕粗蛋白中茶皂素成分进行吸附，具体是将NKA‑Ⅱ树脂经去离子水充分浸泡溶胀后，装填于内径为12cm，长度为25cm的层析柱中，将浓度为20mg/mL油茶籽粕粗蛋白提取物溶液通过层析柱，流速为100mL/h，吸附完成后的蛋白提取液颜色变浅，呈微黄色；（2）将油茶籽粕蛋白配制成浓度为4.5‑5mg/L的溶液，调节pH为7，加入风味蛋白酶，在45℃下水解2‑3h，然后灭酶，调节pH至8‑8.5，加入胰蛋白酶，在50℃下继续水解0.5‑1h，加入的蛋白酶总量占蛋白质量的5‑7%，其中风味蛋白