与绵羊单胎产羔数相关的SNP分子标记、引物组、试剂盒及检测方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114717330A(43)申请公布日2022.07.08(21)申请号202210384426.6(22)申请日2022.04.13(71)申请人中国农业科学院北京畜牧兽医研究所地址100193北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人储明星贺小云王翔宇狄冉(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师刘奇(51)Int.Cl.C12Q1/6888(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表1页附图1页(54)发明名称与绵羊单胎产羔数相关的SNP分子标记、引物组、试剂盒及检测方法和应用(57)摘要本发明涉及与绵羊单胎产羔数相关的SNP分子标记、引物组、试剂盒及检测方法和应用，属于分子标记与遗传育种技术领域。本发明提供了一种与绵羊单胎产羔数相关的SNP分子标记，基于绵羊基因组序列信息版本号Oar_v3.1，所述SNP分子标记位于绵羊第12号染色体上41926327bp位点处。本发明所述分子标记与绵羊单胎高产羔数性状显著相关，利用所述分子标记对初生绵羊PIK3CD基因型进行快速分型即可确定待测绵羊产羔性能，便于种羊选留。CN114717330ACN114717330A权利要求书1/1页1.一种与绵羊单胎产羔数相关的SNP分子标记，其特征在于，基于绵羊基因组序列信息版本号Oar_v3.1，所述SNP分子标记位于绵羊第12号染色体上41926327bp位点处。2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述分子标记在SEQIDNO.1所示的核苷酸序列自5’端起第100位存在G/A碱基突变。3.基于权利要求1或2所述的分子标记的利用SequenomSNP技术检测绵羊单胎产羔数的引物组，其特征在于，所述引物组包括核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的上游引物、核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的下游引物和核苷酸序列如SEQIDNO.4所示的延伸引物。4.一种利用SequenomSNP技术检测绵羊单胎产羔数的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测权利要求1或2所述分子标记的试剂或权利要求3所述的引物组。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液、SAP酶和SNP分子标记标准阳性模板。6.基于权利要求3所述引物组或权利要求4或5所述试剂盒的检测绵羊单胎产羔数的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取待测绵羊的基因组DNA；2)以所述待测绵羊的基因组DNA为模板，利用权利要求3所述引物组或权利要求4或5所述试剂盒中的正向引物和反向引物进行PCR反应，获得PCR产物，用SAP酶消化所述PCR产物，得到消化产物；3)以所述消化产物为模板，使用权利要求3所述引物组或权利要求4或5所述试剂盒中的延伸引物进行延伸反应，得到延伸产物；4)利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术分析延伸产物，确定绵羊PIK3CD基因型。7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述PCR反应的反应体系，每5μL包括：浓度为10ng/μL基因组DNA样品1μL，10×PCR反应缓冲液0.5μL，25mmol/LMgCl2溶液0.4μL，25μmol/LdNTPs0.1μL，5U/μLTaqDNA聚合酶0.2μL，10pmol/L正向引物和反向引物各0.5μL和去离子水1.8μL；所述PCR反应的反应程序为：95℃2min；95℃20s，58℃30s，72℃60s，40个循环；72℃5min。8.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述延伸反应的反应体系，每2μL包括：10×iplexBufferPlus0.2μL，iplexTerminator0.2μL，0.6～1.3μmol/L延伸引物0.94μL，iplexEnzyme0.041μL，去离子水0.619μL；所述延伸反应的反应程序为：95℃30s；95℃5s，(52℃5s，80℃5s，5个循环)，40个循环；72℃3min。9.检测权利要求1或2所述SNP分子标记的试剂在单胎多羔绵羊新品种培育或绵羊群体繁殖力提升中应用。10.权利要求3所述的引物组或权利要求4或5所述的试剂盒在检测绵羊PIK3CD基因型中的应用。2CN114717330A说明书1/6页与绵羊单胎产羔数相关的SNP分子标记、引物组、试剂盒及检测方法和应用技术领域[0001]本发明涉及分子标记与遗传育种技术领域，具体涉及与绵羊单胎产羔数相关的SNP分子标记、引物组、试剂盒及检测方法和应用。背景技术[0002]我国是全球肉羊养殖和羊肉生产消费第一大国。我国全年羊肉消费占所有肉类消费的6.5％以上，排在肉类消费第4名。据202