一种具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114796488A(43)申请公布日2022.07.29(21)申请号202210326242.4A61P7/02(2006.01)(22)申请日2022.03.30(71)申请人华中农业大学地址430000湖北省武汉市洪山区狮子山街1号(72)发明人韩鹤友李书挺(74)专利代理机构南京创略知识产权代理事务所(普通合伙)32358专利代理师李荣芳(51)Int.Cl.A61K41/00(2020.01)A61K38/58(2006.01)A61K9/51(2006.01)A61K47/69(2017.01)A61K47/46(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图6页(54)发明名称一种具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开一种具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒及其制备方法和应用，从墨鱼的墨囊中提取黑色素纳米粒子，从小鼠血液中提取血小板膜，并将天然的水蛭素包裹在黑色素纳米粒子外部接枝的COF内，再将血小板膜包裹在其外部进行伪装，以实现血栓靶向溶栓治疗。本发明将天然水蛭素包裹于黑色素纳米粒子外的COF内，降低了蛋白酶的降解作用，延缓其在体内的清除速度，提高其生物利用率，并且在长期的治疗过程中，水蛭素缓慢释放，与凝血酶形成不可逆的复合物，从而抑制血栓的复发。此外，本发明利用血小板膜靶向定位，不存在机体免疫反应，具有较好的安全性；且本发明仿生纳米颗粒与光热相结合，达到快速溶栓的效果，具有良好的医疗应用前景及实用价值。CN114796488ACN114796488A权利要求书1/2页1.一种具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：1）提取黑色素纳米颗粒：从背部切开墨鱼，找到墨囊并取出，弃去外皮层，得到黑色颗粒，将其溶于水中，离心，弃沉淀，取上清，再次离心，弃上清，取沉淀，获得到黑色素纳米粒子，备用；2）提取血小板膜，备用：从小鼠尾部取全血置于蓝色抗凝管中，采用差速离心法从全血中分离血小板，得到富含血小板的血浆；然后进行反复冷冻‑解冻‑冷冻，使血小板破裂，得到血小板膜；3）黑色素纳米颗粒接枝COF：将步骤1）制备的黑色素纳米粒子溶于乙腈溶液中，形成黑色素纳米粒子乙腈溶液；然后向该黑色素纳米粒子乙腈溶液加入对苯二甲醛，室温搅拌反应至完全溶解，随后连续加入四氨基卟啉并缓慢搅拌，然后添加冰醋酸构建形成COF的酸性环境；最后将反应混合物在涡旋混合器上剧烈振摇数秒，再静置一段时间，获得外部接枝COF的黑色素纳米粒子；4）制备仿生纳米颗粒：将水蛭素加入步骤3）中制备的外部接枝有COF的黑色素纳米粒子中，反应一段时间，再加入步骤2）中提取的血小板膜，超声混匀后静置一段时间，然后离心收集沉淀，冷冻干燥后，即可得到具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒。2.根据权利要求1所述的具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒的制备方法，其特征在于：步骤3）中，所述黑色素纳米粒子乙腈溶液中黑色素纳米粒子的浓度为5mg/mL。3.根据权利要求1所述的具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒的制备方法，其特征在于：步骤3）中，所述对苯二甲醛的浓度为0.03mmol/L，其加入量为5.1mg/mL。4.根据权利要求1所述的具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒的制备方法，其特征在于：步骤3）中，所述四氨基卟啉浓度为0.02mmol/L，其加入量为7.1mg/mL。5.根据权利要求1所述的具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒的制备方法，其特征在于：步骤3）中，所述冰醋酸浓度为12mol/L，其加入量为0.7mL/mL。6.根据权利要求1所述的具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒的制备方法，其特征在于：步骤4）中，所述水蛭素为天然水蛭素，其与外部接枝有COF的黑色素纳米粒子的混合质量比为：纳米粒子︰水蛭素=1︰2～3。7.根据权利要求1所述的具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒的制备方法，其特征在于：步骤4）中，所述血小板膜的加入量与外部接枝有COF的黑色素纳米粒子的混合质量比为：纳米粒子︰血小板膜=1︰0.1。8.根据权利要求1所述的具有抗血栓功能的仿生纳米颗粒的制备方法，其特征在于：步骤1）中，第一次离心为以2000～3500r/min的速度离心5～10min，第二次离心速度为以8000r/min的速度离心20min；步骤2）中，所述反复冷冻‑解冻‑冷冻的次数为5次；步骤3）中，所述室温搅拌反应至完全溶解的时间为2h；加入四氨基卟啉的速度控制为每滴间隔3秒，缓慢搅拌的时间为30秒；将反应混合物在涡旋混合器上剧烈振摇的时间为10s，静置时间为72h；步骤4）中，将水蛭素加接枝有COF的黑色素纳米粒子反应时间为2～3h，超声混匀后的静置时间为48～72h；离心收集沉淀为以8000r/min的速度离心10min。9.一种具