一种铁皮石斛种子长期保存方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114847275A(43)申请公布日2022.08.05(21)申请号202210663726.8(22)申请日2022.06.13(71)申请人贵州省亚热带作物研究所地址562400贵州省黔西南布依族苗族自治州兴义市下五屯峰林东路1号(72)发明人王晓敏罗晓青周玉飞(74)专利代理机构重庆以知共创专利代理事务所(普通合伙)50226专利代理师钟亮(51)Int.Cl.A01N3/00(2006.01)A01F25/00(2006.01)A01C1/00(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种铁皮石斛种子长期保存方法(57)摘要本发明公开了一种铁皮石斛种子长期保存方法，具体涉及农业种子保存技术领域，包括以下具体步骤：步骤一、每年11月‑12月，采集颜色正常、饱满、成熟、无病虫害、未开裂的铁皮石斛蒴果，切除蒴果两端，蒴果表皮清洗；步骤二、在无菌超净工作台里，将上述步骤二中收集的蒴果浸泡在75％的酒精中，然后用无菌水冲洗3次，再利用消毒剂进行杀菌、消毒处理；步骤三、收集蒴果内种子，在低倍显微镜下进行种子活力检测，选择胚饱满的种子备用。本发明采用的铁皮石斛种子长期保存方法，操作简单，成本较低，种子活力较高，取出后不需要对种子解冻即可进行无菌播种，在铁皮石斛种苗繁育阶段及在资源保存研究上值得使用。CN114847275ACN114847275A权利要求书1/2页1.一种铁皮石斛种子长期保存方法，其特征在于：包括以下具体步骤：步骤一、每年11月‑12月，采集颜色正常、饱满、成熟、无病虫害、未开裂的铁皮石斛蒴果，切除蒴果两端，蒴果表皮清洗；步骤二、在无菌超净工作台里，将上述步骤二中收集的蒴果浸泡在75％的酒精中，然后用无菌水冲洗3次，再利用消毒剂进行杀菌、消毒处理；步骤三、收集蒴果内种子，在低倍显微镜下进行种子活力检测，选择胚饱满的种子备用；步骤四、配置饱和氯化锂溶液液体干燥剂，把该干燥剂放于干燥器中，同时在干燥器内平铺铁皮石斛种子，用凡士林密封干燥4天；步骤五、将干燥后的种子迅速转移并装满至密封的玻璃小管中；步骤六、选择体积大于步骤五中玻璃小管体积的密闭容器，在该密闭容器中装入硅胶作为干燥指示器，然后同时放置4‑5个装有种子的密封玻璃小管；步骤七、在步骤六的玻璃容器表面粘贴标签，该标签上填写有种子相关信息，然后把该玻璃容器放置在温度在零下20℃的冰箱中长期保存。2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛种子长期保存方法，其特征在于：在步骤二中，种子浸泡在75％的酒精中的时间为1分钟。3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛种子长期保存方法，其特征在于：在步骤二中所使用的消毒剂为10％次氯酸钠、0.1％氯化汞、0.1％氯化汞与吐温20按照比例10000:1的混合溶液中的一种，其中，使用10％次氯酸钠时需要浸泡15分钟，使用0.1％氯化汞时需要浸泡7分钟，使用0.1％氯化汞与吐温20按照比例10000:1的混合溶液需要浸泡7分钟。4.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛种子长期保存方法，其特征在于：在步骤七中，标签上的种子相关信息包括种子来源、种子采收时间、种子采收地点、种子消毒处理方式、种子干燥处理方式、干燥时间、保存时间。5.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛种子长期保存方法，其特征在于：在步骤七的长期保存阶段中，每年进行一次种子活力检测，淘汰没有活力的种子，具体操作为：在低倍显微镜下观测种子胚的发育情况，如种胚发育饱满的种子，留下继续使用。6.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛种子长期保存方法，其特征在于：在步骤一中挑选无病虫害的铁皮石斛蒴果的方法为：观察铁皮石斛植株叶片是否枯萎、观察铁皮石斛植株的叶片与茎枝是否出现褐色或灰色病斑、观察铁皮石斛植株叶片的边缘以及背面是否出现幼虫；在挑选的过程中，一旦发现铁皮石斛植株上出现上述三种情况之一，则说明该铁皮石斛蒴果存在病虫害，需要将其剔除。7.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛种子长期保存方法，其特征在于：在步骤四中饱和氯化锂溶液液体干燥剂的配制步骤如下所示：以配制1L饱和氯化锂溶液液体干燥剂为例：S1、称量84.8g氯化锂；S2、溶解：在烧杯中加入乙醇溶解氯化锂；S3、恢复至室温转移：将烧杯内冷却后的溶液沿玻璃棒小心转入1L的容量瓶中，玻璃棒下端应靠在容量瓶刻度线以下；S4、洗涤：用乙醇洗涤烧杯和玻璃棒2‑3次，并将洗涤液转入容器中，振荡，使溶液混合2CN114847275A权利要求书2/2页均匀；S5、定容：向容量瓶中加乙醇至刻度线以下1cm‑2cm处时，改用胶头滴管加乙醇，使溶液凹面恰好与刻度线相切；S6、摇匀：盖好瓶塞，用食指顶住瓶塞，另一只手的手指托住瓶底，反复上下颠倒，使溶液混合均匀，最后将配制好的溶液倒入试剂瓶