特异性识别鼠伤寒沙门氏菌的T细胞亚群及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114854686A(43)申请公布日2022.08.05(21)申请号202210532475.XC12Q1/02(2006.01)(22)申请日2022.05.12G01N15/14(2006.01)A61K35/17(2015.01)(71)申请人中国农业大学A61K39/112(2006.01)地址100193北京市海淀区圆明园西路2号A61P31/04(2006.01)(72)发明人韩红兵位韶艾越C12R1/42(2006.01)(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245专利代理师董函竹(51)Int.Cl.C12N5/0783(2010.01)C12N15/11(2006.01)C40B50/06(2006.01)C12Q1/6806(2018.01)C12Q1/6869(2018.01)C12Q1/18(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表1页附图7页(54)发明名称特异性识别鼠伤寒沙门氏菌的T细胞亚群及其应用(57)摘要本发明公开了特异性识别鼠伤寒沙门氏菌的T细胞亚群及其应用。具体地公开了特异性识别鼠伤寒沙门氏菌的CD4+TCRVβ6+T细胞亚群在制备用于治疗沙门氏菌病、筛选治疗沙门氏菌病的候选药物、制备用于增强机体抵抗和清除沙门氏菌感染的药物以及在抗鼠伤寒沙门氏菌的疫苗研究中的应用。本发明还提供了一种构建沙门氏菌病TCRβ链基因测序文库的方法。本发明首次发现了CD4+TCRVβ6+T细胞亚群具有特异性识别鼠伤寒沙门氏菌的功能，用鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠后，CD4+TCRVβ6+T细胞亚群的频率显著升高，经实验表明CD4+TCRVβ6+T细胞亚群在抵抗和清除沙门氏菌感染的过程中具有重要作用。CN114854686ACN114854686A权利要求书1/1页1.CD4+TCRVβ6+T细胞亚群的下述任一种应用：A1)在制备用于治疗沙门氏菌病的药物中的应用；A2)在筛选治疗沙门氏菌病的候选药物中的应用；A3)在制备用于增强机体抵抗和清除沙门氏菌感染的药物中的应用；A4)在抗鼠伤寒沙门氏菌的疫苗研究中的应用；A5)在制备识别鼠伤寒沙门氏菌的试剂中的应用；所述CD4+TCRVβ6+T细胞亚群为表达TCRVβ6和CD4的T细胞。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述沙门氏菌病是由鼠伤寒沙门氏菌引起的疾病。3.权利要求1中所述的CD4+TCRVβ6+T细胞亚群作为生物标志物在制备用于诊断或辅助诊断沙门氏菌感染的试剂或试剂盒中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述诊断或辅助诊断沙门氏菌感染是通过检测所述CD4+TCRVβ6+T细胞亚群的数量比例实现。5.权利要求1中所述的CD4+TCRVβ6+T细胞亚群。6.一种构建TCRβ链基因测序文库的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：B1)提取沙门氏菌感染的样本中的总RNA；B2)将所述总RNA反转录成带有通用接头的cDNA；B3)以所述cDNA为模板，以SEQIDNo.1所示的上游引物F和SEQIDNo.2所示的下游引物R进行第一轮PCR扩增，第一轮扩增产物稀释后作为模板，进行第二轮PCR扩增，得到第二轮PCR产物，纯化后得到所述TCRβ链基因测序文库。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述沙门氏菌感染的样本为人或动物的血液样本、脾脏样本或淋巴结样本。8.用于构建沙门氏菌病TCRβ链基因测序文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求6中所述的上游引物F和下游引物R。9.权利要求8所述的试剂盒在构建沙门氏菌病TCRβ链基因测序文库中的应用。2CN114854686A说明书1/7页特异性识别鼠伤寒沙门氏菌的T细胞亚群及其应用技术领域[0001]本发明属于细胞免疫领域，具体涉及特异性识别鼠伤寒沙门氏菌的CD4+TCRVβ6+T细胞亚群及其应用。背景技术[0002]鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)是一群非适应性或泛嗜性的沙门氏菌，宿主比较广泛，能引起各种家禽和哺乳动物的传染病，也可引起人类感染，具有重要的公共卫生意义。鼠伤寒沙门氏菌是人和动物肠道主要病原菌之一，可引起人类的肠胃炎，是由饮用或食用污染的水或食物引起的，主要症状为急性结肠炎，伴随着炎症性腹泻。除此之外，鼠伤寒沙门氏菌还可引发牛肠炎和小鼠的系统性疾病。沙门氏菌病不仅对畜牧业生产造成巨大经济损失，而且也严重威胁人类健康。目前抗菌药物的使用是治疗沙门氏菌感染的重要措施，但由于滥用、乱用抗菌药物导致了细菌的严重耐药，一些沙门氏菌携带具耐药因子的遗传质粒，耐药因子可传递对多种抗生素的耐药性，尤其可在敏感细菌中散播，给沙门氏菌感染的治疗造成困难。因此，寻找新型药物及治疗方案已成为当前