lncRNACACF吸附miR-520b-3p在调控人脐静脉内皮细胞周期中的应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114958849A(43)申请公布日2022.08.30(21)申请号202210582507.7C12Q1/02(2006.01)(22)申请日2022.05.26C12Q1/66(2006.01)C12Q1/6888(2018.01)(71)申请人华南农业大学C12Q1/6851(2018.01)地址510642广东省广州市天河区五山路G01N15/14(2006.01)483号G01N1/30(2006.01)申请人广东省实验动物监测所(72)发明人张豪白国锋王希龙廖伟莉潘金春袁晓龙(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司44245专利代理师张珍(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/85(2006.01)C12N5/10(2006.01)权利要求书2页说明书8页序列表3页附图5页(54)发明名称lncRNACACF吸附miR-520b-3p在调控人脐静脉内皮细胞周期中的应用(57)摘要本发明公开了lncRNACACF吸附miR‑520b‑3p在调控人脐静脉内皮细胞周期中的应用。本发明采用细胞生物学的方法第一次证实了长链非编码RNACACF在人脐静脉内皮细胞中竞争性吸附miR‑520b‑3p，并通过AnnexinV‑FITC/PI技术以及miR‑520b‑3p和lncRNACACF超表达载体共转染回复实验，证实了lncRNACACF吸附miR‑520b‑3p促进人脐静脉内皮细胞周期进程中的应用。CN114958849ACN114958849A权利要求书1/2页1.lncRNACACF在调控人脐静脉内皮细胞周期中的应用，其特征在于：体外环境下，lncRNACACF正调控人脐静脉内皮细胞周期进程；通过调节lncRNACACF的表达水平，可实现人脐静脉内皮细胞周期进程调控；所述的lncRNACACF如SEQIDNO：1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：增加外源性lncRNACACF，S期和G2期细胞占比增加，人脐静脉内皮细胞周期进程加快；抑制lncRNACACF的表达，细胞周期阻滞在G1期，人脐静脉内皮细胞周期进程阻滞。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述的lncRNACACF通过竞争性吸附miR‑520b‑3p，实现人脐静脉内皮细胞周期进程调控。4.miR‑520b‑3p在调控人脐静脉内皮细胞周期中的应用，其特征在于：体外环境下，miR‑520b‑3p负调控人脐静脉内皮细胞周期进程；通过调节miR‑520b‑3p的表达水平，可实现人脐静脉内皮细胞周期进程调控。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：增加外源性miR‑520b‑3p，细胞周期阻滞在G1期，人脐静脉内皮细胞周期进程阻滞；抑制miR‑520b‑3p表达，G1期细胞占比降低，人脐静脉内皮细胞周期进程加快。6.lncRNACACF吸附miR‑520b‑3p在调控人脐静脉内皮细胞周期中的应用，其特征在于：体外环境下，由增加外源性LncRNACACF引起的人脐静脉内皮细胞周期进程的功能表型，能在增加外源性miR‑520b‑3p后回复。7.根据权利要求2、3、5任一项所述的应用，其特征在于：所述的增加外源性lncRNACACF通过基因过表达技术实现，采用的基因过表达载体通过如下方式制备得到：(1)提取人脐静脉内皮细胞的RNA，将其逆转录成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增，得到目的片段；(2)将目的片段连接到用限制性内切酶BamHI和XbaI酶切后的pcDNA3.1载体上，得到重组载体。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：步骤(1)中进行PCR扩增所用引物如下所示：PCR‑CACFForward：5′‑GGGGTACCCCTCACGGAAAGGGGCGG‑3′；PCR‑CACFReverse：5′‑GGAATTCGCCCGGCATGGGGGAC‑3′。9.根据权利要求2、3、5任一项所述的应用，其特征在于：所述的抑制lncRNACACF表达降低通过反义寡核苷酸实现，反义寡核苷酸序列如下：5′‑CGAAUCCACUUUCGCUUCUGAGAUUCACCGGCCUCACACUACCAAAUAGGAGAAAGUAAUCUGUGCAUUUCUUUCGCGUCUGAGAUUCACCGGCCUCCCUGGGCAGACAUUACCUGATT‑3′。10.根据权利要求2、3、5任一项所述的应用，其特征在于：所述的增加外源性miR‑520b‑3p通过miR‑520b‑3p模拟物实现，采用的miR‑520b‑3pmimic的序列如下：5′‑AAAGUGCUUCCUUUUAGAGGG‑3′；所述的抑制miR‑520b‑3p表达降低通过miR‑52