lncRNACACF吸附miR-106a在制备人脐静脉内皮细胞自噬诱导剂中的应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116004629A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202310032365.1C12N5/071(2010.01)(22)申请日2023.01.10C12N15/85(2006.01)C12N15/64(2006.01)(66)本国优先权数据202211487263.02022.11.25CN(71)申请人广东省实验动物监测所地址510663广东省广州市高新科技产业开发区科学城风信路11号申请人华南农业大学(72)发明人王希龙白国锋张豪廖伟莉袁晓龙潘金春(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司44245专利代理师张珍(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书7页C12N15/113(2010.01)序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称lncRNACACF吸附miR-106a在制备人脐静脉内皮细胞自噬诱导剂中的应用(57)摘要本发明公开了lncRNACACF吸附miR‑106a在制备人脐静脉内皮细胞自噬诱导剂中的应用。本发明采用细胞生物学的方法第一次证实了长链非编码RNACACF在人脐静脉内皮细胞中竞争性吸附miR‑106a，并通过GFP‑mRFP‑LC3标记法，证实了lncRNACACF吸附miR‑106a促进人脐静脉内皮细胞自噬进程中的应用。本发明提供了lncRNACACF作为人脐静脉内皮细胞自噬诱导剂的新用途，以及miR‑106a作为人脐静脉内皮细胞自噬抑制剂的新用途，有利于进一步开展人脐静脉内皮细胞自噬相关疾病发生、发展及治疗的研究。CN116004629ACN116004629A权利要求书1/1页1.lncRNACACF在制备人脐静脉内皮细胞自噬诱导剂中的应用，其特征在于：所述的lncRNACACF如SEQIDNO：1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：增加外源性lncRNACACF，人脐静脉内皮细胞自噬水平增加；抑制lncRNACACF的表达，人脐静脉内皮细胞自噬水平降低。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述的lncRNACACF通过竞争性吸附miR‑106a，实现人脐静脉内皮细胞自噬水平调控。4.miR‑106a在制备人脐静脉内皮细胞自噬抑制剂中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：增加外源性miR‑106a，人脐静脉内皮细胞自噬水平降低；抑制miR‑106a表达，人脐静脉内皮细胞自噬水平上升。6.根据权利要求2、3、5任一项所述的应用，其特征在于：所述的增加外源性lncRNACACF通过基因过表达技术实现，采用的基因过表达载体通过如下方式制备得到：(1)提取人脐静脉内皮细胞的RNA，将其逆转录成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增，得到目的片段；(2)将目的片段连接到用限制性内切酶BamHI和XbaI酶切后的pcDNA3.1载体上，得到重组载体。7.根据权利要求2、3、5任一项所述的应用，其特征在于：所述的抑制lncRNACACF表达降低通过反义寡核苷酸实现，反义寡核苷酸序列如下：5′‑CGAAUCCACUUUCGCUUCUGAGAUUCACCGGCCUCACACUACCAAAUAGGAGAAAGUAAUCUGUGCAUUUCUUUCGCGUCUGAGAUUCACCGGCCUCCCUGGGCAGACAUUACCUGATT‑3′。2CN116004629A说明书1/7页lncRNACACF吸附miR‑106a在制备人脐静脉内皮细胞自噬诱导剂中的应用技术领域[0001]本发明属于细胞工程和基因工程技术领域，具体涉及lncRNACACF吸附miR‑106a在制备人脐静脉内皮细胞自噬诱导剂中的应用。背景技术[0002]心肌梗死(MyocardialInfarction，MI)是一种严重危害人类健康的心血管疾病。促进MI后的血管新生能改善MI后的心脏功能。新生的血管是从已有的毛细血管或毛细血管后静脉发展而来，主要包括血管内皮细胞的增殖、出芽和迁移。自噬是将细胞内受损的蛋白质及细胞器运输到溶酶体进行消化降解的过程，是细胞的自我更新，能防止损伤的蛋白质及细胞器的积累，现有研究认为，促进细胞自噬能改善心肌梗死后心功能恢复。[0003]长链非编码RNA(LongNon‑codingRNA，lncRNA)是一类长度超过200nt的非编码RNA，可作为重要调节因子参与到包括MI在内的各种疾病的发生和/或发展中。研究表明，lncRNA可以通过竞争性吸附miRNA，抑制微小核糖核酸(microRNA，miRNA)对mRNA的降解作用，进而发挥其生理功能。lncRNACACF(Cardiacautophagycontributoryfactor，暂命名)测序编号为lncRNAXLOC_083933在