一种水稻油体蛋白基因OsOle6及其编码蛋白与应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114990134A(43)申请公布日2022.09.02(21)申请号202210597877.8C12N15/66(2006.01)(22)申请日2022.05.30C07K14/415(2006.01)A01H5/10(2018.01)(71)申请人扬州大学A01H6/46(2018.01)地址225009江苏省扬州市大学南路88号(72)发明人张昌泉李雪飞刘巧泉陆彦黄李春李钱峰赵冬生范晓磊张林(74)专利代理机构扬州苏中专利事务所(普通合伙)32222专利代理师许必元(51)Int.Cl.C12N15/29(2006.01)C12N15/84(2006.01)C12N15/113(2010.01)C12N15/55(2006.01)权利要求书2页说明书8页序列表3页附图2页(54)发明名称一种水稻油体蛋白基因OsOle6及其编码蛋白与应用(57)摘要本发明提供一种水稻油体蛋白基因OsOle6及其编码蛋白与应用，水稻油体蛋白基因OsOle6及其编码蛋白参与稻米脂肪酸含量调控并影响稻米品质，采用常规方法，对OsOle6基因进行敲除、改变、抑制或过量表达等方式改变OsOle6基因的表达水平，进而获得具有不同脂肪酸含量的水稻，本发明创建的水稻与亲本对照相比，在植株的生长发育和基本农艺性状方面没有显著差异，只是特异影响稻米的脂肪酸含量；本发明制备的低脂肪酸含量稻米具有较好的食味品质，在优良食味水稻培育应用中具有重大育种价值；另一方面，本发明制备的高脂肪酸含量稻米具有更高的营养价值并且在稻米油生产方面也具有重要价值。CN114990134ACN114990134A权利要求书1/2页1.一种水稻油体蛋白基因OsOle6，其特征在于，所述油体蛋白基因OsOle6的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，或者所述油体蛋白基因OsOle6的核苷酸序列与SEQIDNo.1所示序列至少90％同源。2.根据权利要求1所述的一种水稻油体蛋白基因OsOle6，其特征在于，所述OsOle6编码的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，或者所述OsOle6编码的氨基酸序列与SEQIDNO.2所示序列至少90％同源。3.一种如权利要求1或2所述的水稻油体蛋白基因OsOle6在培育不同脂肪酸含量水稻品系中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用的方法如下：对水稻油体蛋白基因OsOle6进行编辑、敲除、修饰、抑制或过量表达，使得目标水稻品种中的OsOle6基因表达水平改变，进而获得不同脂肪酸含量的水稻品种。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述基因编码过程中所用的载体为pC1300‑Cas9‑Ole6，所述pC1300‑Cas9‑Ole6包含基因OsOle6，载体系统为CRISPR/Csa9，系统中包含中间载体SK‑gRNA和最终载体pC1300‑Cas9。6.权利要求5所述载体pC1300‑Cas9‑Ole6的制备方法，其特征在于，所述的方法如下：将引物与AarI限制性内切酶切割后的线性中间载体SK‑gRNA混合，并用T4DNA连接酶连接，得到质粒为SK‑gRNA‑Ole6，再利用限制性内切酶KpnI和BglII切割SK‑gRNA‑Ole6C质粒，回收550bp片段并与经过KpnI和BamHI双酶切过的pC1300‑Cas9载体混合，利用并用T4DNA连接酶连接。7.根据权利要求6所述的载体pC1300‑Cas9‑Ole6的制备方法，其特征在于，所述引物序列如下：序列名称序列序列编号primer15'GGCAGGCGGCGGCTACGGTGACCG3'SEQIDNO.3primer25'AAACCGGTCACCGTAGCCGCCGCC3'SEQIDNO.4。8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述基因过量表达过程中所用的过量表达载体为Ubi‑Ole6，其特征在于，所述Ubi‑Ole6包含基因OsOle6，载体为植物表达载体pCAMBlA1300，其中包括来自水稻自身组成性高表达基因OsUbi的启动子。9.权利要求8所述过量表达载体Ubi‑Ole6的制备方法，其特征在于，所述的方法如下：将经限制性内切酶BamHI和SalI切割线性化的携带有OsUbi启动子的pCAMBlA1300‑Ubi载体与包含OsOle6的PCR扩增产物进行混合，用ClonExpressUltraOneStepCloningKit进行同源重组连接。10.根据权利要求9所述过量表达载体Ubi‑Ole6的制备方法。其特征在于，所述PCR扩增引物序列如下：2CN114990134A权利要求书2/2页3CN114990134A说明书1/8页一种水稻油体蛋白基因OsOle6及其编码蛋白与应用技术领域[0001]