花生青枯菌效应蛋白RipXV及其编码基因和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115109128A(43)申请公布日2022.09.27(21)申请号202210674475.3A01H5/00(2018.01)(22)申请日2022.06.15A01H5/12(2018.01)A01H6/54(2018.01)(71)申请人福建农林大学A01H6/82(2018.01)地址350002福建省福州市仓山区上下店C12R1/01(2006.01)路15号(72)发明人张冲陈玉婷钟鑫高眉佳刘露马敏杨欢陈华庄伟建(74)专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司35100专利代理师林文弘蔡学俊(51)Int.Cl.C07K14/195(2006.01)C12N15/31(2006.01)C12N15/84(2006.01)C12N1/21(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表7页附图3页(54)发明名称花生青枯菌效应蛋白RipXV及其编码基因和应用(57)摘要本发明公开了一种花生青枯菌效应蛋白RipXV及其编码基因和应用。所述花生青枯菌效应蛋白RipXV的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，其编码基因RipXV的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。在本氏烟中瞬时超表达RipXV基因，可诱导植物细胞死亡。同源重组法构建△ripXV突变株，接种花生表现致病力增强，表明RipXV可能是一个无毒效应蛋白，在花生致病过程中发挥着重要的作用。通过酵母双杂交技术在花生受青枯菌诱导的cDNA文库中筛选到了RipXV的靶蛋白AhRFL1。本发明对于解析青枯菌与寄主互作的分子机制和建立植物青枯病的综合防治技术策略均有重要意义。CN115109128ACN115109128A权利要求书1/1页1.一种花生青枯菌效应蛋白RipXV，其特征在于，所述花生青枯菌效应蛋白RipXV的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。2.一种花生青枯菌效应蛋白基因RipXV，其特征在于，所述RipXV基因编码权利要求1所述的花生青枯菌效应蛋白RipXV，所述RipXV基因的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。3.一种包含权利要求2所述的花生青枯菌效应蛋白基因RipXV的超量表达载体。4.一种包含权利要求2所述的花生青枯菌效应蛋白基因RipXV的敲除载体。5.一种包含权利要求2所述的花生青枯菌效应蛋白基因RipXV的回补载体。6.一种与权利要求1所述的花生青枯菌效应蛋白RipXV互作的蛋白，其特征在于，所述的蛋白为NBS‑LRR类抗病蛋白AhRFL1，其核苷酸序列如SEQIDNo.3所示,蛋白序列如SEQIDNo.4所示。7.权利要求1所述的花生青枯菌效应蛋白RipXV在作为效应子蛋白激发植物防卫反应、过敏反应和/或激发植物抗病基因表达中的应用。8.权利要求2的花生青枯菌效应蛋白基因RipXV在培育对花生致病力增强的转基因工程菌中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述培育对花生致病力增强的转基因工程菌的方法是将出发菌株中的RipXV基因敲除，筛选得到对花生致病力增强的转基因工程菌；所述的出发菌株为花生青枯菌（Ralstoniasolanacearum）。2CN115109128A说明书1/6页花生青枯菌效应蛋白RipXV及其编码基因和应用技术领域[0001]本发明涉及植物病害防治研究领域，具体涉及一种花生青枯菌效应蛋白RipXV及其编码基因和在植物青枯病中的潜在价值和应用前景。背景技术[0002]青枯雷尔氏菌（Ralstoniasolanacearum）引起的青枯病是世界上重要的植物病害之一。该病原菌具有寄主范围多、生理小种丰富、地理分布广、致病力变异快，发病条件多样、防治困难等特点，其引起的植物病害造成了巨大的经济损失。目前，青枯病害的侵染和致病机制还未完全清楚，因此，从青枯菌的致病机理入手，寻找有效的作用靶标对病害的防治至关重要。Ⅲ型分泌系统是青枯菌的致病性决定因子，青枯菌利用注射状的T3SS向寄主细胞内注射大量的效应蛋白激活或抑制寄主的防御反应，从而引起寄主感病或诱导非寄主植物产生超敏反应。[0003]植物病原物在侵染寄主植物时会分泌与寄主植物R基因产物相互作用激发植物免疫系统的的一类蛋白质，被称为效应蛋白。编码诱导R基因介导抗性的病原体效应器的基因被定义为Avr基因。效应蛋白包括毒性蛋白和无毒蛋白，毒性蛋白是使进入宿主细胞的病原菌完全发挥毒性所必需的一类蛋白；无毒蛋白是能直接或间接被植物识别的一类蛋白，能引发过敏反应。多数效应蛋白能够改变寄主的细胞结构和功能，加速病原菌的侵染，因此植物进化出了能特异性识别不同效应蛋白的R蛋白。植物与病原菌的相互作用，受病原avr（无毒性）基因和相应植物抗病性（R）基因等位基因之间特定的相互作用控制，即“基因对基因”互作。在该模型