一种编辑水稻SSIIIa基因培育高抗性淀粉籼稻品种的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115029377A(43)申请公布日2022.09.09(21)申请号202210513590.2A01H1/02(2006.01)(22)申请日2022.05.11A01H1/04(2006.01)(71)申请人广东省农业科学院水稻研究所地址510640广东省广州市天河区五山路省农科院(72)发明人郭洁刘传光周新桥陈达刚陈可陈友订(74)专利代理机构广州科粤专利商标代理有限公司44001专利代理师刘明星朱聪聪(51)Int.Cl.C12N15/84(2006.01)C12N15/54(2006.01)A01H5/00(2018.01)A01H6/46(2018.01)权利要求书1页说明书6页序列表18页附图4页(54)发明名称一种编辑水稻SSIIIa基因培育高抗性淀粉籼稻品种的方法(57)摘要本发明公开了一种编辑水稻SSIIIa基因培育高抗性淀粉籼稻品种的方法。是对水稻的SSIIIa基因进行编辑敲除，使的水稻SSIIIa基因表达量降低，获得高抗性淀粉籼稻品种。本发明提供的一种应用CRISPR‑CAS9技术对水稻淀粉合成酶SSIIIa基因进行定点编辑，选育出高抗性淀粉含量、高直链淀粉含量的籼稻品种，产量高，抗稻瘟病，以满足糖尿病人对高抗性淀粉含量稻米的需求，本发明方法简单，育种周期短，能够大大提高了育种效率。CN115029377ACN115029377A权利要求书1/1页1.一种编辑水稻SSIIIa基因培育高抗性淀粉籼稻品种的方法，其特征在于，是对水稻的SSIIIa基因进行编辑敲除，使的水稻SSIIIa基因表达量降低，获得高抗性淀粉籼稻品种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的对水稻的SSIIIa基因进行编辑敲除，其靶点位于基因的第5内含子和第6外显子。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的靶点，其序列如下：ST‑A:5’‑GTCTCCAGTTAGTGTTCCAT‑3’；ST‑B:5’‑GTATGGACAATATGAATGGG‑3’。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，针对靶点序列的的oligo序列如下：STA(+):TGTGTGTCTCCAGTTAGTGTTCCAT；STA(‑):AAACATGGAACACTAACTGGAGACCA；STB(+)：TGTGTGTATGGACAATATGAATGGG；STB(‑)：AAACCCCATTCATATTGTCCATACCA。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的对水稻的SSIIIa基因进行编辑敲除是用crispr/cas载体构建SSIIIa基因的敲除载体来编辑敲除SSIIIa基因。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的获得高抗性淀粉籼稻品种，其被编辑后的SSIIIa基因的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的水稻是籼稻品种南桂占。8.编辑敲除水稻SSIIIa基因在培育高抗性淀粉籼稻品种中的应用。9.编辑敲除水稻SSIIIa基因在培育高直链淀粉籼稻品种中的应用。10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述的水稻是籼稻品种南桂占。2CN115029377A说明书1/6页一种编辑水稻SSIIIa基因培育高抗性淀粉籼稻品种的方法技术领域：[0001]本发明属于生物技术领域，涉及一种编辑水稻SSIIIa基因培育高抗性淀粉稻米的方法。背景技术：[0002]在华南地区，稻米为绝大多数人口的主食，也是营养和能量的主要来源，但普通稻米具有较高的血糖指数，不适用于日益增多的广大糖尿病患者，尤其是非胰岛素依赖的Ⅱ型糖尿病患。抗性淀粉(ResistantStarch，RS)是指“在健康个体的小肠中不能被吸收的淀粉或淀粉降解产物”，有着重要的生理功能。而抗性淀粉具有降低餐后血糖峰值以及提高人体对矿物质的吸收等功能，食用高抗性淀粉稻米可降低糖尿病患者的发病几率，有效地控制血糖指数和胰岛素水平。开发高抗性淀粉稻米供糖尿病患者作为口粮，对广大的糖尿病患者而言，辅助治疗及健康维持成本大大降低，因此存在非常迫切的市场需求。[0003]高抗性淀粉含量水稻新品种选育易受到水稻遗传资源数量和来源的限制，同时抗性淀粉测定无法在田间操作，育种过程中无法直接进行大田选择，因此直接筛选高抗性淀粉材料的工作难以开展，通过如分子标记辅助选择或基因编辑等遗传改良手段开发高抗性淀粉含量稻米品种用于生产及产业化是一种重要技术手段。[0004]在华南地区，稻米为绝大多数人口的主食，对日益增多的糖尿病患者以及肥胖症患者，高抗性淀粉含量水稻品种具有非常迫切的市场需求。传统的育种方法耗时耗力，抗性淀粉含量测定难度大，导致高抗性淀粉新品种的培育难度大、周期长，成本高。发明内容：[000