一种高抗性淀粉含量、耐高低温籼稻品种的选育方法及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115152617A(43)申请公布日2022.10.11(21)申请号202210795353.X(22)申请日2022.07.07(71)申请人湖南农业大学地址410128湖南省长沙市芙蓉区农大路1号(72)发明人邓化冰唐文帮肖云华冷恬恬张桂莲卢学丹王峰(74)专利代理机构郑州优盾知识产权代理有限公司41125专利代理师冉珊敏(51)Int.Cl.A01H1/02(2006.01)A01H1/00(2006.01)A01H1/04(2006.01)G01N21/31(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图2页(54)发明名称一种高抗性淀粉含量、耐高低温籼稻品种的选育方法及其应用(57)摘要本发明属于作物育种领域，涉及水稻育种，特别是指一种高抗性淀粉含量、耐高低温籼稻品种的选育方法及其应用。本发明采用筛选到的抗性淀粉含量高于5%的籼稻材料进行杂交，在F5至F9世代各世代逐代交替在高温、低温胁迫条件下进行结实率选择，选育抗性淀粉含量高于8%且耐高低温的籼稻品种，针对性强，是高抗性淀粉含量和耐高低温优异性状的有效聚合。培育的高抗性淀粉含量、耐高低温籼稻品种能满足我国糖尿病、肥胖患者等特殊群体对稻米的需求，同时能增加水稻产品的附加值，具有较大的应用价值。CN115152617ACN115152617A权利要求书1/2页1.一种高抗性淀粉含量、耐高低温籼稻品种的选育方法，其特征在于，步骤如下：（1）筛选直链淀粉含量高于20%的籼稻种质资源，进行稻米抗性淀粉含量的测定；（2）筛选经步骤（1）测定后抗性淀粉含量高于5%的籼稻种质资源；（3）以步骤（2）的抗性淀粉含量高于5%的籼稻种质资源为亲本，经杂交获得杂种F1；（4）种植杂种F1选择真杂种混收得到F2世代，种植F2世代单株混收性状Ⅰ的F3世代，种植F3世代单株收种性状Ⅰ的F4世代，多株行种植F4世代选择优良株行单株收种性状Ⅱ的F5世代，多株行种植F5世代选择优良株行单株收种性状Ⅲ的F6世代，分株系种植F6世代选性状Ⅳ的株系进行单株混收种子作为F7世代，分株系种植F7世代选性状Ⅴ的株系进行单株混收种子作为F8世代，分株系种植F8世代选性状Ⅴ的株系进行单株混收种子作为F9世代，种植F9世代选性状Ⅵ的株系进行单株混收种子作为F10世代，筛选抗性淀粉含量高于8%的即为高抗性淀粉含量水稻品种。2.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于，所述步骤（1）中稻米抗性淀粉含量的测定方法，步骤为：a.将待测稻米粉碎、过筛得样品米粉，与抗性淀粉含量为39%的标样一同置于密闭容器内平衡水分3‑7天，测定样品米粉的水分含量；b.称取步骤a中样品米粉100mg±5mg于15ml离心管中，加入4mL现配的胰α‑淀粉酶悬浮液，经振荡混匀后37℃±0.5℃水浴准确振荡16h，然后加入4mL无水乙醇涡旋混匀，离心后倒掉上清液，再加入2.0mL50%乙醇溶液，重悬浮，旋涡振荡，再加入6.0mL50%乙醇溶液混匀，离心后倒掉上清液，倒置离心管去除试管内的液体；c.向经步骤b处理后的试管内加入2.0mL氢氧化钾溶液，在冰水状态搅拌20min后，边搅拌边向各个试管中按顺序加入8.0mLpH=3.8乙酸钠缓冲液和0.1mL的淀粉葡萄糖苷酶原液，混匀，取出试管后，于50℃±0.5℃水浴30min；对于抗性淀粉含量≥10%的样品，用水将试管里的样品转移至100ml容量瓶中加水定容置刻度线；对于含量＜10%的样品则直接进行离心；d.含量＜10%的样品离心后取上清液，与3mlGOPOD‑氨基安替比林混合液混合，50℃±0.5℃水浴20min后取出，放置5min，进行测定，同时制备D‑葡萄糖标准比色溶液、空白溶液与样品米粉和标样进行吸光值的检测；e.计算测定样品米粉和标样的抗性淀粉含量，标样的结果在39%±1.95%范围内时，说明本批次测定的结果可靠，超过上述范围则该批次样品重测。3.根据权利要求2所述的选育方法，其特征在于，所述步骤b中胰α‑淀粉酶悬浮液pH值为6.0，包含终浓度30U/mL胰α‑淀粉酶和终浓度3U/mL淀粉葡萄糖苷酶原液，购自Megazyme公司。4.根据权利要求3所述的选育方法，其特征在于，所述步骤c中氢氧化钾溶液的浓度为2mol/L，淀粉葡萄糖苷酶原液的浓度为3300U/mL；步骤d中GOPOD‑氨基安替比林混合液pH为7.4，其中含有终浓度12000U/L的葡萄糖氧化酶、终浓度650U/L过氧化物酶、0.4mmol/L4‑氨基安替比林0.4mmol/L、0.05mol/L磷酸二氢钾、0.053mol/L氢氧化钠、1.5g/L对羟基苯甲酸和0.05g/L叠氮化钠；D‑葡萄糖标准比色溶液包含0.1mL1.0g/L的D‑葡萄糖标准储备液和3.0m