枯草芽孢杆菌抗菌肽BsR1及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115028692A(43)申请公布日2022.09.09(21)申请号202210714854.0(22)申请日2022.06.22(71)申请人华中农业大学地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号(72)发明人宋沛董五辈(74)专利代理机构武汉宇晨专利事务所(普通合伙)42001专利代理师龚莹莹(51)Int.Cl.C07K14/32(2006.01)C12N15/31(2006.01)A01N37/46(2006.01)A01P1/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表1页附图7页(54)发明名称枯草芽孢杆菌抗菌肽BsR1及其应用(57)摘要本发明属于生物技术领域，具体公开了枯草芽孢杆菌抗菌肽BsR1及其应用，申请人通过指示菌内置文库技术，构建枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）330‑2基因组文库，经筛选、生物信息学预测和改造最终得到抗菌肽BsR1。申请人发现抗菌肽BsR1对水稻白叶枯病菌（两个生理小种）、水稻细菌性条斑病菌、野油菜黄单胞菌以及多种芽孢杆菌等生长具有抑制作用，且热稳定性及紫外稳定性强，对哺乳动物和人无害，无溶血性，可将其应用于植物病虫害的生物防治，或可作为抗菌剂。CN115028692ACN115028692A权利要求书1/1页1.一种人工合成的抗菌肽，所述抗菌肽为SEQIDNO.1所示。2.编码权利要求1所述抗菌肽的基因。3.权利要求1所述的抗菌肽或权利要求2所述的基因在制备抑菌剂中的应用。4.权利要求1所述的抗菌肽或权利要求2所述的基因在制备抗菌药物中的应用。5.根据权利要求3或4所述的应用，所述的抑菌剂或抗菌药物中的菌为枯草芽孢杆菌（B.subtilis），青枯病菌(R.solanacearum)，稻黄单胞菌条斑病致病变种（Xanthomonasoryzaepv.oryzicola），小麦苗枯病菌(C.fangii)、野油菜黄单胞菌栖绒毛致病变种（Xanthomonascampestrispv.Holcicola）和/或番茄溃疡病菌(C.michiganensis)。2CN115028692A说明书1/6页枯草芽孢杆菌抗菌肽BsR1及其应用技术领域[0001]本领域属于生物技术领域，具体涉及枯草芽孢杆菌抗菌肽BsR1及其应用。背景技术[0002]枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)属芽孢杆菌属，革兰氏阳性菌，周生鞭毛，能运动，可形成内生抗逆芽孢，是一种需氧菌。枯草芽孢杆菌同时也是一种植物内生菌，在植物健康和抗病中起着至关重要的作用。内生细菌的发生密度低于病原体，并且通常不会在宿主中引起任何过敏反应，这表明宿主植物不将其视为病原体(Hallmann,vonQuadtetal.2011)。据报道，几种内生细菌和根际细菌对作物健康具有有益作用(Wilhelm,Arthoferetal.1998,Santoyo,Moreno‑Hagelsiebetal.2015,Goswami,Dekaetal.2017,Walitang,Kimetal.2017)。在不同植物中被报告为内生菌的细菌属包括芽孢杆菌，伯克霍尔德氏菌，纤维单胞菌，锁骨杆菌，弯曲杆菌，杆状芽孢杆菌，假单胞菌，根瘤菌，沙雷氏菌等(RecuencoandVuurde2000,Lodewyckx,Vangronsveldetal.2002,Zinniel,Lambrechtetal.2002)。大多数内生菌起源于根际。然而，也有报道称某些细菌通过种子垂直传播(Truyens,Weyensetal.2014)。许多内生细菌显示出对抗真菌植物病原体的拮抗潜力。内生菌也可以通过生产一系列天然产物而受益，这些天然产物可以用于医药，农业或工业(Ryan,Germaineetal.2008)。[0003]抗菌肽(AMPs)，也被称为宿主防御肽，是一种短而又通常带正电荷的肽，存在于从微生物到人类的各种生命形式中(Mahlapuu,Hakanssonetal.2016)。通常低于30‑40个氨基酸，一般都具有抗菌活性。AMP是多种多样的，并且可以根据它们的来源、组成和结构细分为几组。然而，它们也具有某些共同的结构特征，例如(i)氨基酸组成：AMP中最丰富的残基是阳离子(精氨酸和赖氨酸)和疏水性(色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和异亮氨酸)；(ii)净电荷：大多数AMP在生理pH值下带正电荷，尽管少数亚组包括阴离子肽；(iii)两亲性：由其氨基酸组成和排列所赋予的；(iv)结构和构象的多样性，包括α‑螺旋、β‑折叠、非常规结构，甚至扩展构象(后两者在短AMP中特别丰富)。大多数这些结构是两亲性的，在特定的实验条件下诱导，这也促进了它们与脂质双层的相互作用。事实上，生物膜