一种抗菌肽及其在枯草芽孢杆菌中的表达和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115873076A(43)申请公布日2023.03.31(21)申请号202211486803.3A23K20/147(2016.01)(22)申请日2022.11.24C12R1/125(2006.01)(71)申请人青岛农业大学地址266000山东省青岛市城阳区长城路(72)发明人刘晓东马延玺朱明哲林婷婷王述柏(74)专利代理机构北京识然知识产权代理事务所(普通合伙)11975专利代理师曾庆国(51)Int.Cl.C07K14/00(2006.01)C07K19/00(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12N15/75(2006.01)C12N1/21(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称一种抗菌肽及其在枯草芽孢杆菌中的表达和应用(57)摘要本发明提供一种抗菌肽LLK；其氨基酸序列为SEQIDNO:1。本发明所提供的抗菌肽用于制备抗菌制品。本发明所提供的抗菌肽LLK具有良好的热稳定性和PH值稳定性，利用稀释法抗菌试验测定重组LLK对4种临床分离菌株的MIC在12μg/mL～25μg/mL之间，通过琼脂孔穴扩散法验证了重组抗菌肽LLK的体外抑菌能力，说明枯草杆菌制备抗菌肽LLK具有潜在利用价值，为下一步临床试验提供了借鉴参考。CN115873076ACN115873076A权利要求书1/1页1.一种抗菌肽，其特征在于，所述的抗菌肽包含有：1)氨基酸序列为SEQIDNO:1的多肽；2)在1)中的序列上取代、缺失、添加一个或数个氨基，且具有1)中功能的多肽。2.一种融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白包含有权利要求1所述的抗菌肽。3.一种核酸片段，其特征在于，所述的核酸片段用于编码权利要求1所述的抗菌肽。4.如权利要求3所述的核酸片段，其特征在于，所述的核酸片段的序列为SEQIDNO:2。5.权利要求1所述的抗菌肽在制备抗菌制品中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的制品为饲料添加剂或抗菌剂。7.一种饲料添加剂，其特征在于，所述的饲料添加剂中包含有权利要求1所述的抗菌肽。8.一种重组表达权利要求1所述的抗菌肽的方法，其特征在于，所述的方法是在宿主菌中重组表达权利要求1所述的抗菌肽。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的宿主菌为枯草芽孢杆菌。10.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的重组枯草芽孢杆菌用于制备权利要求1所述的抗菌肽。2CN115873076A说明书1/5页一种抗菌肽及其在枯草芽孢杆菌中的表达和应用技术领域[0001]本发明属于抗菌制品研发技术领域，具体涉及一种抗菌肽及其在枯草芽孢杆菌中的表达和应用。背景技术[0002]因此，避免抗生素的滥用和寻找抗生素替代品，已经成为了当前畜牧养殖行业的重点研究方向。目前比较被认可的抗生素替代品主要有微生态制剂、中药活性成分提取物、酶制剂和抗菌肽等。其中，抗菌肽由于其抗菌谱广，抗菌活性高，杀菌速度快，毒副作用低等优势，近年来备受青睐，逐渐成为抗感染候选药物。自第一种抗菌肽由瑞典人G.Boman发现并分离纯化至今，已有近2700种抗菌肽被发现，其中约有三分之二来源于动物。[0003]抗菌肽普遍存在于自然界的生物体内，但虽然其种类繁杂，但在个体内含量却极低，且不易分离和纯化。目前国内高校生物实验室制备抗菌肽的主要方法为基因工程法，该法是通过将所需抗菌肽的基因与表达载体连接后，转入感受态细胞中进行表达。常用的表达细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、毕赤酵母等。其中，枯草杆菌由于内毒素低微及表达量高等优势，被广泛应用在抗菌肽的制备中。而且抗菌肽分子质量较小，若仅构建单拷贝基因的重组质粒,易出现表达量过低甚至不表达的现象。发明内容[0004]本发明的目的是提供一种抗菌肽及其在枯草芽孢杆菌中的表达和应用，从而弥补现有技术的不足。[0005]本发明首先提供一种抗菌肽LLK；其中所述的抗菌肽包含有：[0006]1)氨基酸序列为GLGDFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPTREK(SEQIDNO:1)的多肽；[0007]2)在1)中的序列上取代、缺失、添加一个或数个氨基，且具有1)中功能的多肽；[0008]编码所述的抗菌肽的核酸片段，其一种具体的核苷酸序列如下(SEQIDNO:2)：[0009]GGCTTAGGCGACTTTCGTAAATCTAAAGAGAAAATTGGCAAAGAATTTAAAAGAATCGTTCAGAGAATCAAAGATTTTTTACGCAATCTGGTACCGACACGCGAGAAG。[0010]其本发明所提供的抗菌肽用于制备抗菌制品；[0011]本发明的抗菌肽还用于制备饲料添加剂或抗菌剂。[0012]本发明再