一种抑制猪卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115094058A(43)申请公布日2022.09.23(21)申请号202210655002.9(22)申请日2022.06.10(71)申请人南京农业大学地址211225江苏省南京市溧水区白马镇国家农业科技园南京农业大学基地(72)发明人杜星李齐发李琦琦潘增祥杨柳(74)专利代理机构南京天华专利代理有限责任公司32218专利代理师徐冬涛李晓峰(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/11(2006.01)C12N15/85(2006.01)C12N15/12(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表4页附图6页(54)发明名称一种抑制猪卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用(57)摘要本发明公开了一种抑制猪卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用，属于lncRNA的功能探究技术研发领域，公开了所述lncRNANORFA的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；所述lncRNANORFA在猪健康卵泡中的表达水平显著高于闭锁卵泡；在体外培养的猪卵巢颗粒细胞中过表达lncRNANORFA可显著抑制细胞凋亡水平，而敲减内源性lncRNANORFA则出现相反结果；所述lncRNANORFA的靶基因为TGFBR2基因，两者均具有抑制猪卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的能力，本发明提供的lncRNANORFA为抑制卵泡闭锁、提高母猪繁殖力提供技术支持，同时对养猪业的实际生产具有重要经济价值。CN115094058ACN115094058A权利要求书1/1页1.一种抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡的lncRNANORFA，该lncRNANORFA的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。2.扩增权利要求1所述抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡的lncRNANORFA的引物对，其特征在于，该引物对包括核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQIDNo.3所示的反向引物。3.权利要求1所述的lncRNANORFA在抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞凋亡中的应用，其特征在于，通过在卵巢颗粒细胞中敲入或过表达所述的lncRNANORFA，提高抗卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的能力。4.权利要求1所述lncRNANORFA的靶基因在抑制猪卵泡闭锁和卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于，通过在卵巢颗粒细胞中敲入或过表达所述lncRNANORFA的靶基因，提高抗卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的能力；所述的靶基因为TGFBR2基因，该TGFBR2基因的序列号为ENSSSCG00025024102。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，扩增所述TGFBR2基因的引物对包括核苷酸序列如SEQIDNo.4所示的正向引物和核苷酸序列如SEQIDNo.5所示的反向引物。6.权利要求1所述的lncRNANORFA在促进体外培养猪卵母细胞成熟能力中的应用，其特征在于，过表达所述lncRNANORFA能够提高猪卵丘‑卵母细胞复合体在体外培养过程中卵母细胞的成熟率。7.权利要求1所述lncRNANORFA的靶基因在促进体外培养猪卵母细胞成熟能力中的应用，其特征在于，过表达所述lncRNANORFA的靶基因能够提高猪卵丘‑卵母细胞复合体在体外培养过程中卵母细胞的成熟率。8.根据权利要求3或权利要求6所述的应用，其特征在于，该应用通过提高猪卵巢颗粒细胞中所述TGRBR2基因的表达水平实现。2CN115094058A说明书1/6页一种抑制猪卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用技术领域[0001]本发明属于分子生物学中lncRNA功能探究技术研发领域，涉及一种抑制猪卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的lncRNA及其应用。背景技术[0002]众所周知，卵泡的正常发育和排卵对于维持雌性哺乳动物繁殖过程至关重要，而卵泡闭锁作为雌性哺乳动物卵巢组织中一种普遍的生理现象，不仅降低了原始卵泡库的利用率，造成生物资源的浪费，同时严重制约了雌性哺乳动物繁殖力的发挥。因此，探究卵泡闭锁的分子机制对于减少卵泡闭锁、提高排卵率以及维持雌性动物正常的繁殖过程具有重大意义。目前，研究发现颗粒细胞凋亡或程序性死亡是雌性哺乳动物卵泡闭锁的主要诱因，而前者主要受到一个由体内、外多因素组成的复杂网络调控。近期，相关研究表明长链非编码RNAs(Longnon‑codingRNAs,lncRNAs)作为一类重要的表观遗传因子在上述过程中发挥重要作用。[0003]LncRNAs是一类长度大于200nt、缺乏开放阅读框或编码蛋白能力的内源性RNA分子。特征分析发现lncRNAs的表达丰度较低、进化保守性与稳定性较差、且具有严格的组织表达模式，上述特点也成为了lncRNAs研究过程中的难点。根据目前已发表的高通量测序研究表明lncR