LncRNA TAB2-AS及其在猪卵巢颗粒细胞中的应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114934051A(43)申请公布日2022.08.23(21)申请号202210582494.3C12N15/66(2006.01)(22)申请日2022.05.26C12N5/10(2006.01)A61K31/7088(2006.01)(71)申请人华南农业大学A61P15/08(2006.01)地址510642广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人张哲云冰李加琪吕媛媛周尹祺曾李清张豪袁晓龙陈赞谋(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司44245专利代理师张珍(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/11(2006.01)C12N15/85(2006.01)权利要求书2页说明书8页序列表3页附图3页(54)发明名称LncRNATAB2-AS及其在猪卵巢颗粒细胞中的应用(57)摘要本发明公开了LncRNATAB2‑AS及其在猪卵巢颗粒细胞中的应用。本发明以lncRNATAB2‑AS为研究对象，通过DNA甲基转移酶抑制剂5‑Aza‑CdR处理细胞，检测DNA甲基化对其转录的影响；通过核质分离实验和构建lncRNA的EGFP融合蛋白载体检测其亚细胞定位及其编码能力；通过构建lncRNA的过表达载体和合成其反义寡核苷酸，检测其对猪卵巢颗粒细胞功能的影响。本发明验证了DNA甲基化能抑制lncRNATAB2‑AS的转录；阐明了其对猪卵巢颗粒细胞的影响：其能促进猪卵巢颗粒细胞增殖，抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡。这对于研究卵巢卵泡发育、闭锁的机制具有很好的应用价值。CN114934051ACN114934051A权利要求书1/2页1.一种长链非编码RNA，命名为lncRNATAB2‑AS，其特征在于：其核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。2.权利要求1中所述的长链非编码RNA相关的生物材料，其特征在于：为下述生物材料中的任意一种或多种组合：1)编码所述长链非编码RNA的DNA分子；2)含有1)中所述DNA分子的表达盒；3)含有1)中所述DNA分子的重组载体，或含有2)中所述表达盒的重组载体；4)抑制所述长链非编码RNA表达的反义寡核苷酸；5)含有1)中所述DNA分子的重组细胞，或含有2)中所述表达盒的重组细胞，或含有3)中所述重组载体的重组细胞，或含有4)中所述反义寡核苷酸的重组细胞。3.根据权利要求2中所述的生物材料，其特征在于：1)中所述DNA分子通过如下方式制备得到：提取猪卵巢颗粒细胞的RNA，将其逆转录成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增，得到目的片段。4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于：PCR扩增所用引物如下所示：lncRNATAB2‑ASForward：5′‑CGCGGATCCACTGCCCCAACAGTAAAGCA‑3′；lncRNATAB2‑ASReverse：5′‑CCGCTCGAGGCCCTCATAAGTGCCGATGT‑3′；其中，黑色加粗字体部分为保护碱基，下划线为酶切位点。5.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于：3)中所述重组载体通过如下方式制备得到：将所述DNA分子连接到用限制性内切酶BamHI和XhoI酶切后的pcDNA3.1载体上，得到重组载体。6.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于：4)中所述反义寡核苷酸的序列为：ASO‑lncRNATAB2‑AS‑2：5′‑AAAGGGCTGTAGGTACTGCT‑3′。7.权利要求1中所述的长链非编码RNA或权利要求2‑6任一项中所述的生物材料在猪卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于：体外环境下，所述的长链非编码RNA正调控细胞增殖、细胞凋亡中的任意一种或两种功能表型。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：增加外源性lncRNATAB2‑AS，促进细胞增殖、抑制细胞凋亡；抑制lncRNATAB2‑AS表达，抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。9.权利要求1中所述的长链非编码RNA在制备药物中的应用，其特征在于：所述的药物为下述药物中的任意一种或多种组合：Ⅰ.促进猪卵巢颗粒细胞增殖的药物；Ⅱ.抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡的药物；Ⅲ.促进卵泡发育的药物。10.权利要求2‑5任一项中所述的DNA分子或表达盒或重组载体在制备药物中的应用，其特征在于：所述的药物为下述药物中的任意一种或多种组合：Ⅰ.促进猪卵巢颗粒细胞增殖的药物；Ⅱ.抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡的药物；2CN114934051A权利要求书2/2页Ⅲ.促进卵泡发育的药物。3CN114934051A说明书1/8页LncRNATAB2‑AS及其在猪卵巢颗粒细胞中的应用技术领域[0001]本发明属于细胞工程和基因工程技术领域，具体涉及lncRNATAB2‑AS及其在猪卵巢颗粒细胞中的应用。背景技术[00