氯氰菊酯含量检测用半抗原及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115093347A(43)申请公布日2022.09.23(21)申请号202210700186.6C07C253/30(2006.01)(22)申请日2022.06.20C07K19/00(2006.01)C07K16/44(2006.01)(71)申请人云南省烟草质量监督检测站G01N33/53(2006.01)地址650000云南省昆明市高新开发区科G01N33/535(2006.01)医路41号G01N33/543(2006.01)(72)发明人王春琼李超陈丹孙浩巍G01N33/577(2006.01)张轲张晓伟叶灵蔡洁云徐安传秦世春龙杰曾彦波张燕杨艺敏张庆刚(74)专利代理机构成都市鼎宏恒业知识产权代理事务所(特殊普通合伙)51248专利代理师吴佳洁(51)Int.Cl.C07C255/39(2006.01)权利要求书2页说明书10页附图1页(54)发明名称氯氰菊酯含量检测用半抗原及其应用(57)摘要本申请公开了一种氯氰菊酯含量检测用半抗原及其应用，具体涉及一种氯氰菊酯含量检测用半抗原及其制备方法，本发明还公开了所述半抗原在抗体、试剂盒方面的应用。针对氯氰菊酯含量检测半抗原建立的酶联免疫试剂盒能实现快速大批量待检测产品的检测，使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时检测大批量的样本，适用于农产品尤其是烟草中氯氰菊酯的现场监控和大量样本的筛查。CN115093347ACN115093347A权利要求书1/2页1.一种氯氰菊酯含量检测用半抗原，其特征在于，化学名称为：(E)4‑((4‑(含氰基的((3‑(2,2‑二氯乙烯基)2、2‑二甲基环丙基甲酰氯)氧)甲基)苯基)二氮烯基‑3‑羟基苯甲酸；化学结构式为：所述氯氰菊酯含量检测用半抗原的制备方法包括以下步骤：以氨基苯乙腈为原料经重氮化反应得到反应物，所述反应物与3‑羟基苯甲酸进行偶合反应后再与二氯菊酸进行缩合反应，得到所述氯氰菊酯含量检测用半抗原。2.根据权利要求1所述的氯氰菊酯含量检测用半抗原，其特征在于，所述氯氰菊酯含量检测用半抗原的制备方法包括以下步骤：1)加乙醇溶解氨基苯乙腈后，加入强酸溶液和水充分搅拌后，冷却到0～5℃，加入亚硝酸钠水溶液搅拌1h，得到原料液；2)加氢氧化钠水溶液溶解3‑羟基苯甲酸，加入水充分搅拌后，冷却到0～5℃，滴加全部所述原料液，保持0～5℃下反应4h后停止反应，对所得溶液进行分离纯化，得到中间产物；3)溶解二氯菊酸后加入三氯甲烷，冷却至0～5℃，再加入草酰氯搅拌2h，加入全部中间产物并继续搅拌1h，恢复至室温，继续搅拌2h后停止反应，加入水并补加三氯甲烷，得到反应液；4)对所得反应液进行分离纯化得到所述氯氰菊酯含量检测用半抗原。3.根据权利要求2所述的氯氰菊酯含量检测用半抗原，其特征在于，所述步骤1)中所述强酸溶液为1mol/L的HCl溶液；优选地，所述步骤2)中分离纯化操作包括以下步骤：用酸溶液调节pH值到6，以乙酸乙酯为溶剂萃取三次后合并所得有机相，旋蒸蒸干，用体积比为10:1的1,2‑二氯乙烷‑正己烷混合溶液重结晶，得到所述中间产物；优选地，所述步骤2)中所用酸溶液为6mol/LHCl溶液；每次萃取所用溶剂的体积为100mL；优选地，所述步骤4)中所述分离纯化操作包括以下步骤：对所得反应液充分震荡，静置，分去水相，水洗有机相加100mL水充分震荡，静置，分去水相，浓缩蒸干，上硅胶柱，用体积比为10:1的二氯甲烷‑甲醇混合溶液洗脱分离，得到所述氯氰菊酯含量检测用半抗原。4.一种氯氰菊酯含量检测用抗原，其特征在于，为由如权利要求1～3中任一项所述半抗原与载体蛋白偶联得到的偶联物。5.根据权利要求4所述的氯氰菊酯含量检测用抗原，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白。6.一种氯氰菊酯含量检测用抗体，其特征在于，为由如权利要求4或5所述抗原经动物2CN115093347A权利要求书2/2页免疫得到的抗体；所述抗体与氯氰菊酯发生特异性免疫反应；优选地，所述氯氰菊酯含量检测用抗体为氯氰菊酯单克隆抗体。7.一种氯氰菊酯含量检测用酶联免疫试剂盒，其特征在于，包括：酶标板、抗体，所述酶标板包被有如权利要求4或5所述的氯氰菊酯含量检测用抗原；所述抗体为如权利要求6中所述氯氰菊酯含量检测用抗体。8.根据权利要求7所述的氯氰菊酯含量检测用酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述氯氰菊酯含量检测用酶联免疫试剂盒的检测样本为经过预处理的烟草样本；所述烟草样本预处理包括以下步骤：将烟叶样本捣碎，称取0.95～1.05g捣碎的样本至50mL聚苯乙烯离心管中，加入5mL乙腈，用涡旋混合仪涡动3min，混匀，3000×g室温下离心5min；移取50μL上层清液至2m