一种植物病害生物防治菌株的筛选方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115109827A(43)申请公布日2022.09.27(21)申请号202210860546.9C12R1/125(2006.01)(22)申请日2022.07.21(71)申请人信阳农林学院地址464006河南省信阳市平桥区北环路1号(72)发明人王春生张巧玉智亚楠赵筱岑尤伟晨史洪中王国君陈利军(74)专利代理机构郑州豫原知识产权代理事务所(普通合伙)41176专利代理师轩丽杰(51)Int.Cl.C12Q1/04(2006.01)C12N1/02(2006.01)C12N1/20(2006.01)A01G13/00(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图3页(54)发明名称一种植物病害生物防治菌株的筛选方法(57)摘要本发明涉及防治菌株实验技术领域，且公开了一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，所述筛选方法包括以下步骤：S1：筛选培养基；S2：制备锭粉培养基后，进行紫外线灭菌20min；S3：制备土壤稀释液，选取果园内、花坛地方的土样，铲产去表层，取5～15CMM处5克的土壤样品，加入事先灭菌好的装有100mL无菌水的250mL的三角瓶内，30℃恒温振荡200rpm，将菌胶团打碎，得泥水混合物，备用；S4：将泥水混合物转入装有100mL筛选培养基的500mL锥形瓶中，30℃恒温静置培养至培养基浑浊，得到菌悬液；S5：获得菌种；S6：单个菌种初筛；S7：接种到斜面培养基中，放入37℃的恒温培养箱中培养2～7天，得到枯草芽孢杆菌防治菌株再加入苹果植物苗。CN115109827ACN115109827A权利要求书1/2页1.一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，其特征在于：所述筛选方法包括以下步骤：S1：筛选培养基，将4g/牛肉膏、10g/L蛋白胨、5G/L氯化钠、可溶性淀粉10.0g、蒸馏水1000ml和加入氧菌20g琼脂，将锭粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中，将培养基导入培养皿中；S2：制备锭粉培养基后，进行紫外线灭菌20min；S3：制备土壤稀释液，选取果园内、花坛地方的土样，铲产去表层，取5～15CMM处5克的土壤样品，加入事先灭菌好的装有100mL无菌水的250mL的三角瓶内，30℃恒温振荡200rpm，将菌胶团打碎，得泥水混合物，备用；S4：将泥水混合物转入装有100mL筛选培养基的500mL锥形瓶中，30℃恒温静置培养至培养基浑浊，得到菌悬液；S5：将得到菌悬液放置于30℃培养箱中使菌液吸附进培养基中培养1～3天，获得菌种；S6：单个菌种初筛，观察菌落表面，若发现有杂菌，进行再一次地分离纯化；观察有锭粉圈的菌落，并测量淀粉圈的直径D，菌落直径r，计算D/r的比值，进而进行拍照，选择淀粉圈大的菌落作为后续实验的菌种；S7：接种到斜面培养基中，放入37℃的恒温培养箱中培养2～7天，得到枯草芽孢杆菌防治菌株。2.根据权利要求1所述的一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，其特征在于：在S2和S3步骤中间加入恒温振荡器进行培育。3.根据权利要求1所述的一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，其特征在于：所述S1步骤中筛选培养基均含有2％可溶性锭粉的LB培养基的两种方案：a)豆饼粉4％，玉米粉3％，Na2HPO40.8％，(NH4)2SO40.4％，NH4Cl0.15％，H2Ob)豆饼粉5.6％，玉米粉7.2％，Na2HPO40.8％，(NH4)2SO40.4％，NH4Cl0.13％，CaCl20.13％，α—淀粉酶50g。4.根据权利要求1所述的一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，其特征在于：所述S1步骤中包括称重单元，所述称重单元用于将所需培养基的配方通过玻棒挑取、放入器皿和称量纸上进行称量，称量后放入蒸馏水中，再将称量纸分离。5.根据权利要求1所述的一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，其特征在于：所述S1步骤中还包括溶化单元，所述溶化单元用于将所需克数的可溶性淀粉放入一个小烧杯中，加入少量蒸馏水，搅拌成糊状，然后将糊状溶液均匀倒入少于培养基总体积的沸水中，一边搅拌一边加热，待其溶化成透明状后继续在电炉上加热5分即制成可溶性淀粉溶液。6.根据权利要求1所述的一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，其特征在于：所述S4步骤中用过接种环取菌种，放入1000ml无菌水的三角瓶中，振摇；用一支1ml无菌吸管吸取1ml菌液加入盛有10ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一盛有10ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10‑1、10‑2、10‑3、10‑4、10‑5、10‑6不同稀释度的菌液。7.根据权利要求1所述的一种植物病害生物防治菌株的筛选方法，其特征在于：所述S4步骤中将平板底面分别用记号笔写上10‑4、10‑5、