全雌性型节瓜的KASP分子标记、引物及筛选方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115125325A(43)申请公布日2022.09.30(21)申请号202210729736.7C12N15/11(2006.01)(22)申请日2022.06.24A01H1/04(2006.01)(71)申请人广东省农业科学院蔬菜研究所地址510640广东省广州市天河区金颖路66号(72)发明人王敏彭庆务杨松光何晓明江彪林毓娥刘文睿陈林闫晋强(74)专利代理机构广州广典知识产权代理事务所(普通合伙)44365专利代理师万志香(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6879(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)权利要求书1页说明书7页序列表1页附图3页(54)发明名称全雌性型节瓜的KASP分子标记、引物及筛选方法(57)摘要本发明公开了一种节瓜全雌性型的KASP分子标记、引物及筛选方法，所述KASP分子标记位于节瓜第8号染色体第14520499处碱基，该处碱基发生T到C的突变。在本发明中，精确定位了与节瓜全雌性型紧密连锁的KASP分子标记，并通过该KASP分子标记设计了用于筛选全雌性型节瓜的引物对，利用该引物对，可以在分子层面实现全雌性型和普通性型节瓜材料的精准筛选，提高节瓜雌性育种的效率，具有重要的应用价值。CN115125325ACN115125325A权利要求书1/1页1.一种节瓜全雌性型的KASP分子标记，其特征在于，所述KASP分子标记位于节瓜第8号染色体第14520499处碱基，该处碱基发生T到C的突变。2.一种筛选全雌性型节瓜的引物，其特征在于，所述引物包括：序列如SEQIDNO.1所示的正向引物、以及序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的反向引物。3.根据权利要求2所述的筛选全雌性型节瓜的引物，其特征在于，所述反向引物的5'端连接有荧光基团FAM或HEX。4.根据权利要求3所述的筛选全雌性型节瓜的引物，其特征在于，所述序列如SEQIDNO.2所示的反向引物的5'端连接有荧光分子HEX，所述序列如SEQIDNO.3所示的反向引物的5'端连接有荧光分子FAM。5.权利要求1所述的KASP分子标记、或权利要求2～4任一项所述的引物在制备筛选全雌性型节瓜的试剂盒中的应用。6.权利要求1所述的KASP分子标记、或权利要求2～4任一项所述的引物在节瓜辅助选择育种中的应用。7.一种筛选全雌性型节瓜的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2～4任一项所述的筛选全雌性型节瓜的引物。8.一种筛选全雌性型节瓜的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：以待测节瓜样品的DNA为模板，权利要求2～4任一项所述的引物为引物，进行PCR扩增，检测位于节瓜第8号染色体第14520499碱基是否发生T到C的突变。9.根据权利要求8所述的筛选全雌性型节瓜的方法，其特征在于，若待测节瓜样品的基因型为T:T，则待测节瓜样品为全雌性型节瓜；若待测节瓜样品的基因型为C:C，则待测节瓜样品为普通性型节瓜；若待测节瓜样品的基因型为T:C，则待测节瓜样品为杂合普通性型节瓜。10.根据权利要求8所述的筛选全雌性型节瓜的方法，其特征在于，所述PCR扩增程序为：95℃预变性10min；94℃变性15s，61～55℃退火1min，退火温度每循环递减0.6℃，上述过程10个循环；然后94℃变性15s，57℃延伸1min，30个循环，最后30℃运行1min。2CN115125325A说明书1/7页全雌性型节瓜的KASP分子标记、引物及筛选方法技术领域[0001]本发明属于分子标记技术领域，更具体地，本发明涉及一种全雌性型节瓜的KASP分子标记、引物及筛选方法。背景技术[0002]节瓜营养丰富，风味独特，具有清热、解暑、消肿等功效，是重要的功能保健型蔬菜，已成为我国内销和出口的名优特产蔬菜。节瓜富含维生素、氨基酸、微量元素和抗氧化物质，具有清热消暑和止血消炎的功效，是一种药食兼用的多功能蔬菜，已成为华南地区重要的日常消费蔬菜。[0003]节瓜以幼嫩果实为主要食用器官，有连续坐果习性，提高雌花比例有利于实现早熟、高产。全雌性材料具有第一雌花节率低、连续开雌花且数目多、无雄花等特点。在节瓜、丝瓜与苦瓜育种过程中，利用全雌系作为母本配制的杂种一代可以显著提升早熟性，增加单株坐果数和产量。同时，在繁制杂种一代种子时，利用优良全雌系作为母本，雌雄同株的自交系作父本，通过虫媒授粉可以显著提高繁种效率，且可避免人工去雄不彻底，确保杂种一代制种的纯度。因此，全雌性状是影响节瓜产量和杂种一代繁制种的重要性状。[0004]但是，目前我国节瓜优异的全雌性型种质资源较为匮乏，且可以应用到全雌育种中的分子标记较少，极大影响了节瓜全雌育种的效率。广东省农业科学院蔬菜研究