一株枯草芽孢杆菌及其液固双相发酵方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115181707A(43)申请公布日2022.10.14(21)申请号202211006159.5A23K10/18(2016.01)(22)申请日2022.08.22C12R1/125(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNO.254992022.08.08(71)申请人北京青蓝伟业科技有限公司地址100192北京市海淀区西小口路66号中关村东升科技园·北领地B-3楼3层301申请人北京大北农科技集团股份有限公司(72)发明人庞远祥崔东良张海亮韩瑞玲万红兵吴昊张乐孙晓杰刘滢李碧晨黄翠英范祥伟刘雪连(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图2页(54)发明名称一株枯草芽孢杆菌及其液固双相发酵方法(57)摘要本发明属于微生态领域，本发明提供了一株枯草芽孢杆菌新菌株，其保藏编号为CGMCCNO.25499，本发明的枯草芽孢杆菌具有良好的产酶和抑菌特性。本发明还提供了一种液固双相发酵生产枯草芽孢杆菌菌剂的方法。本发明通过优化芽孢杆菌发酵培养基配方，显著提升了枯草芽孢杆菌的有效活菌数。本发明通过液体深层发酵，得到液体发酵产物，将液体发酵产物接种于固体发酵培养基中，进行固体发酵，得到枯草芽孢杆菌发酵物；将枯草芽孢杆菌发酵物烘干后粉碎即得枯草芽孢杆菌菌剂。本发明利用廉价碳氮源作为培养基结合液固双相发酵工艺生产枯草芽孢杆菌菌剂，提高有效活菌数，降低菌剂的原料与后处理成本。CN115181707ACN115181707A权利要求书1/1页1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，其保藏编号为CGMCCNO.25499。2.一种液固双相发酵生产枯草芽孢杆菌菌剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)所述枯草芽孢杆菌一级种子液培养：取所述枯草芽孢杆菌平板单菌落，接种于一级种子培养基中，装液量50mL/150mL，37℃培养18小时，得到一级种子液；(2)所述枯草芽孢杆菌二级种子液培养：将步骤1培养的所述枯草芽孢杆菌一级种子液接种于二级种子培养基中装液量100mL/250mL，接种量3％，37℃培养8～10h，得到二级种子液；(3)所述枯草芽孢杆菌液体发酵：液体发酵培养基灭菌结束后通冷却水保温至37℃，接入二级种子液，接种量3％，搅拌速度180rpm，维持pH7.0，通气量为0.5～1.5vvm，发酵时间为24h；(4)所述枯草芽孢杆菌固体发酵：将液体发酵后的产物接种于已灭菌的固体发酵培养基中，接种量10％(v/m)，堆料厚度3～5cm，37℃培养72h，每隔24h翻动一次培养基；(5)将所述固体发酵后的发酵物烘干粉碎后即得所述枯草芽孢杆菌菌剂。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(2)的种子培养基为LB培养基。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)液体发酵培养基组分及其用量为：玉米粉5～10g/L,蔗糖4～8g/L，豆粕8～24g/L，硫酸亚铁0.125～0.5g/L，硫酸锰0.125～0.5g/L，碳酸钙0.5～2g/L，磷酸二氢钾0.5～2g/L，硫酸镁1.25～5g/L。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)液体发酵培养基组分及其用量为：玉米粉5g/L，蔗糖8g/L，豆粕24g/L，硫酸亚铁0.125g/L，硫酸锰0.5g/L，碳酸钙1g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁3.75g/L。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)固体发酵培养基组分及其用量为：麦麸45％，葡萄糖5％，稻壳粉20％，玉米粉20％，海藻糖5％，豆粕5％。7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)固体发酵培养基组分及其用量为：玉米粉10％，麦麸60％，稻壳粉20％，蔗糖5％，豆粕5％，料液比为60％。8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)具体为：将所述枯草芽孢杆菌固体发酵物在温度不高于50℃的条件下烘干至含水量10％，粉碎后即得枯草芽孢杆菌菌剂。9.含有权利要求1所述枯草芽孢杆菌菌株的微生态制剂。10.含有权利要求1所述枯草芽孢杆菌菌株的饲料。2CN115181707A说明书1/10页一株枯草芽孢杆菌及其液固双相发酵方法技术领域[0001]本发明属于微生态领域，具体而言，涉及一株枯草芽孢杆菌及其液固双相发酵方法。背景技术[0002]随着集约化养殖业的发展，抗生素在畜禽饲料中的用量越来越大，抗生素的药物残留和抗药性对人类健康的影响带来许多不良影响。饲用益生菌是近年来出现的一类新型饲料添加剂，它可直接饲喂动物并通过调节动物肠道微生态平衡达到预防疾病、促进动物生长和提高饲料利用率的目的，其中芽孢杆菌是应用最广泛的一类饲用益生菌，因为芽