B亚型禽偏肺病毒传代致弱株及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115287270A(43)申请公布日2022.11.04(21)申请号202211223789.8(51)Int.Cl.(22)申请日2022.10.09C12N7/00(2006.01)A61K39/155(2006.01)(83)生物保藏信息A61P31/14(2006.01)CGMCCNO.452612022.08.29A61P11/02(2006.01)(71)申请人中国农业科学院哈尔滨兽医研究所C12R1/93(2006.01)（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心）地址150069黑龙江省哈尔滨市南岗区马端街427号(72)发明人高玉龙王素艳祁小乐陈运通刘长军王笑梅张艳萍李凯高立崔红玉(74)专利代理机构北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司11139专利代理师马鑫权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称B亚型禽偏肺病毒传代致弱株及其应用(57)摘要本发明公开了一种B亚型禽偏肺病毒传代致弱株及其应用。本发明通过在Vero细胞中连续传代来致弱LN16‑V毒株，获得了致弱株LN16‑A，命名为LN16‑A株，其保藏号为：CGMCCNO.45261。将传代致弱株LN16‑A免疫3周龄SPF鸡并进行了系统的免疫保护评价，结果表明LN16‑A免疫机体后，可以诱导产生较高水平的aMPV特异性抗体和中和抗体，对强毒的攻击可提供100%的免疫保护，具有良好的免疫保护效果，可以有效预防强毒攻击造成的病理损伤。本发明为B亚型禽偏肺病毒病的防控提供了新的技术手段，对家禽业健康发展具有重要意义。CN115287270ACN115287270A权利要求书1/1页1.B亚型禽偏肺病毒传代致弱株，命名为LN16‑A株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNO.45261。2.权利要求1所述的B亚型禽偏肺病毒传代致弱株在制备预防由B亚型禽偏肺病毒感染导致的疾病的药物中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的疾病为火鸡鼻气管炎或鸡肿头综合征。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的药物为B亚型禽偏肺病毒弱毒疫苗。5.一种B亚型禽偏肺病毒弱毒疫苗，其特征在于，其有效成分包括权利要求1所述的B亚型禽偏肺病毒传代致弱株。2CN115287270A说明书1/4页B亚型禽偏肺病毒传代致弱株及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种传代致弱株及其应用，特别涉及一种B亚型禽偏肺病毒传代致弱株及其应用，本发明属于生物医药技术领域。背景技术[0002]禽偏肺病毒（avianmetapneumovirus,aMPV）是副粘病毒科，肺病毒亚科，偏肺病毒属家族的成员，其为有囊膜的不分节段单股负链RNA病毒，基因组呈螺旋状包含于核蛋白壳中。该病毒之前被称为禽肺病毒，是火鸡鼻气管炎的病原体。感染鸡后，会导致鸡的肿头综合征（SHS）及产蛋量的急剧下降，以流鼻涕、咳嗽及角弓反张为主要临床症状。该病毒易与其他致病细菌、病毒发生混合感染，从而加重患病鸡的临床症状，延长发病进程，造成更严重的经济损失。[0003]aMPV于1978年在南非首次被分离报道，随后在全世界范围内广泛流行。aMPV的基因组全长约13.3kb，包含8个基因，顺序为3'‑N‑P‑M‑F‑M2‑SH‑G‑L‑5'。基于G基因的抗原性差异，aMPV可分为A、B、C、D四种亚型。A亚型病毒首先在南非和英国分离出来，而B亚型病毒最初在欧洲大陆国家包括匈牙利、德国和意大利被分离出来。近年来，B亚型病毒已发展成为中国的主要流行毒株。C亚型aMPV于1996年首次于美国的火鸡中被发现，随后传播到亚洲，目前在法国的番鸭和中国黄羽肉鸡中均有分离报道。C亚型aMPV具有更广泛的宿主范围，除感染禽类外，还可感染小鼠，是一种潜在的人畜共患病病原。D亚型aMPV目前仅在法国报道。近年来，aMPV在我国的流行日趋严重，并造成了严重的经济损失。1998年，沈瑞忠等首次于黑龙江某肉鸡场中分离鉴定到一株aMPV；2012年，贠炳岭等对黑龙江，吉林，长春及河北地区的鸡群进行了调查，调查结果显示多个鸡场的血清阳性率高达100%；此外，2020年，肖志宇等发现我国鸡群主要流行的是B亚型aMPV，且存在B、C亚型毒株混合感染现象，需进一步加强aMPV在我国流行情况的监测。[0004]虽然该病在我国流行广泛，但关于该病疫苗的研究相比于其它禽病较少。目前普遍认为，弱毒活疫苗和灭活疫苗的联合使用可以很好的预防该病的发生。本发明发明人早期研制出针对该病的灭活疫苗（LN16‑I株），经证明具有良好的安全性和免疫保护效果。但是，国内还没有关于弱毒疫苗的相关报道。在本发明中，我们通过在Vero细胞中连续传代来致弱LN16毒株。我们最终选择了LN