用于防治牛病毒性腹泻病的疫苗组合物及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115364207A(43)申请公布日2022.11.22(21)申请号202210689782.9C12N15/85(2006.01)(22)申请日2022.06.17(71)申请人华中农业大学地址430072湖北省武汉市洪山区狮子山街1号(72)发明人周红波程艳青索朗斯珠王省蒋美君邹佳辉(74)专利代理机构北京智绘未来专利代理事务所(普通合伙)11689专利代理师赵卿(51)Int.Cl.A61K39/12(2006.01)A61P31/14(2006.01)C12N15/40(2006.01)C12N15/62(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表2页附图6页(54)发明名称用于防治牛病毒性腹泻病的疫苗组合物及其制备方法(57)摘要本发明提供一种用于防治牛病毒性腹泻的疫苗组合物，该疫苗组合物包括牛病毒性腹泻病毒的E2蛋白和药学上可接受的佐剂。重组的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白优选是通过HEK‑293细胞外源表达E2蛋白编码基因得到的蛋白，或者是通过HEK‑293细胞外源表达具有牛病毒性腹泻病毒E2蛋白编码序列的融合基因得到的蛋白，融合基因包括所述牛病毒性腹泻病毒E2蛋白编码序列以及位于牛病毒性腹泻病毒E2蛋白编码序列下游的编码牛源IgGFc的DNA序列。本发明制备的亚单位疫苗适合用于经鼻腔喷雾方式施用，能够有效诱导犊牛产生免疫应答，不仅可以产生局部黏膜免疫，还可以产生系统免疫，具有良好的免疫原性和免疫保护效果。CN115364207ACN115364207A权利要求书1/1页1.一种用于防治牛病毒性腹泻的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括重组的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白和药学上可接受的佐剂。2.根据权利要求1所述的用于防治牛病毒性腹泻的疫苗组合物，其特征在于，所述重组的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白是通过HEK‑293、HEK‑293T、HEK‑293E、HEK‑293F、HEK‑293H、HEK‑293S、CHO、BHK、COS、SP2/0中任一种或多种细胞系外源表达的重组E2蛋白。3.根据权利要求1或2所述的用于防治牛病毒性腹泻的疫苗组合物，其特征在于，所述重组的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白是通过HEK‑293细胞外源表达E2蛋白编码基因得到的蛋白，所述E2蛋白编码基因包括SEQIDNo.1所示的DNA序列。4.根据权利要求1或2所述的用于防治牛病毒性腹泻的疫苗组合物，其特征在于，所述重组的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白是通过HEK‑293细胞外源表达具有牛病毒性腹泻病毒E2蛋白编码序列的融合基因得到的蛋白，所述融合基因包括所述牛病毒性腹泻病毒E2蛋白编码序列以及位于所述牛病毒性腹泻病毒E2蛋白编码序列下游的编码牛源IgGFc的DNA序列。5.根据权利要求4所述的用于防治牛病毒性腹泻的疫苗组合物，其特征在于，所述牛源IgGFc是牛源IgG1Fc和/或牛源IgG3Fc。6.根据权利要求4所述的用于防治牛病毒性腹泻的疫苗组合物，其特征在于，所述融合基因具有SEQIDNo.2所示的DNA序列。7.根据权利要求1所述的用于防治牛病毒性腹泻的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物中的E2蛋白浓度为50μg/ml～500μg/ml。8.根据权利要求1所述的用于防治牛病毒性腹泻的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物是经鼻腔施用的疫苗组合物或者经肌肉注射施用的疫苗组合物。9.一种用于防治牛病毒性腹泻的疫苗组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括：步骤S1，利用重组质粒载体在细胞中进行外源性表达获得重组的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白；以及，步骤S2，将所述重组的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白与药学上可接受的佐剂混合乳化制备得到所述疫苗组合物。10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，在步骤S1，利用携带具有SEQIDNo.1所示DNA序列的重组基因的重组质粒载体pcDNA3.1‑BVDV‑tE2在HEK‑293细胞中表达获得所述重组的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白，或者利用携带具有SEQIDNo.2所示DNA序列的融合基因的重组质粒载体pcDNA3.1‑BVDV‑tE2Fc在HEK‑293细胞中表达获得所述重组的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白。2CN115364207A说明书1/9页用于防治牛病毒性腹泻病的疫苗组合物及其制备方法技术领域[0001]本发明属于兽用生物制品的技术领域，具体涉及用于防治牛病毒性腹泻病的疫苗组合物及其制备方法。背景技术[0002]牛病毒性腹泻,又称牛病毒性腹泻‑粘膜病(Bovineviraldiarrhea‑mucosaldisease，BVD‑MD)，是由牛病毒性腹泻病毒(Bovineviraldiarrheavirus，BVDV)引起的一种急性、接触性传染病