猪圆环病毒Taqman多重荧光定量PCR检测方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115478118A(43)申请公布日2022.12.16(21)申请号202210741678.XC12R1/93(2006.01)(22)申请日2022.06.28(71)申请人四川农业大学地址610000四川省成都市惠民路211号四川农业大学(72)发明人周紫峣黄迪周潇潇李敏李玉潇李欢欢周立新岳建国黄云川李科蓉李桂黎任雨昕钟志军刘海峰彭广能(74)专利代理机构深圳腾文知识产权代理有限公司44680专利代理师刘洵(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/686(2018.01)权利要求书1页说明书6页附图8页(54)发明名称猪圆环病毒Taqman多重荧光定量PCR检测方法(57)摘要本申请提供了一种猪圆环病毒Taqman多重荧光定量PCR检测方法及其相应检测试剂盒，本申请的方法和试剂盒中使用针对PCV1、PCV‑2、PCV‑3、PCV‑4设计的，序列为SEQIDNO.1‑12的引物和探针。本申请的方法和试剂盒检测对象全面，在一个4重Taqman多重荧光定量PCR中一次性完成检测，且具有良好的灵敏度和特异性。CN115478118ACN115478118A权利要求书1/1页1.一种非诊断用途的猪圆环病毒Taqman多重荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述方法包括使用以下引物进行Taqman多重荧光定量PCR：序列为SEQIDNO.1的PCV1‑F、序列为SEQIDNO.4的PCV2‑F、序列为SEQIDNO.7的PCV3‑F、序列为SEQIDNO.10的PCV4‑F、序列为SEQIDNO.2的PCV1‑R、序列为SEQIDNO.5的PCV2‑R、序列为SEQIDNO.8的PCV3‑R、序列为SEQIDNO.11的PCV4‑R。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述Taqman多重荧光定量PCR中还使用以下探针：序列为SEQIDNO.3的PCV1‑Probe、序列为SEQIDNO.6的PCV2‑Probe、序列为SEQIDNO.9的PCV3‑Probe、序列为SEQIDNO.12的PCV4‑Probe。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述探针5’和3’端分别标记有以下荧光基团：PCV1‑Probe：CY5和BHQ‑2、PCV2‑Probe：FAM和BHQ‑2、PCV3‑Probe：HEX‑BHQ1、PCV4‑Probe：ROX和BHQ‑2。4.根据权利要求1‑3任一项所述的方法，其中所述Taqman多重荧光定量PCR反应体系为20μ：2XT5FastqPCRMix10μL、10μMPCV1、3、4上游引物各0.1μL、10μMPCV1、3、4下游引物各0.1μL、10μMPCV2上游引物0.3μL、10μMPCV2下游引物0.3μL、10μM探针各0.02μL、模板DNA0.5μL、ddH2O8.22μL。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述Taqman多重荧光定量PCR反应程序为：95℃5min；95℃10s，61℃50s，共30个循环。6.猪圆环病毒Taqman多重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，包括以下引物：序列为SEQIDNO.1的PCV1‑F、序列为SEQIDNO.4的PCV2‑F、序列为SEQIDNO.7的PCV3‑F、序列为SEQIDNO.10的PCV4‑F、序列为SEQIDNO.2的PCV1‑R、序列为SEQIDNO.5的PCV2‑R、序列为SEQIDNO.8的PCV3‑R、序列为SEQIDNO.11的PCV4‑R。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括以下探针：序列为SEQIDNO.3的PCV1‑Probe、序列为SEQIDNO.6的PCV2‑Probe、序列为SEQIDNO.9的PCV3‑Probe、序列为SEQIDNO.12的PCV4‑Probe。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中所述探针5’和3’端分别标记有以下荧光基团：PCV1‑Probe：CY5和BHQ‑2、PCV2‑Probe：FAM和BHQ‑2、PCV3‑Probe：HEX‑BHQ1、PCV4‑Probe：ROX和BHQ‑2。9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其中所述试剂盒中还包含T5FastqPCRMix。10.以下引物和探针在制备检测猪圆环病毒的Taqman多重荧光定量PCR试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物和探针为：序列为SEQIDNO.1的PCV1‑F、序列为SEQIDNO.4的PCV2‑F、序列为SEQIDNO.7的PCV3‑F、序列为SEQIDNO.10的PCV4‑F、序列为SEQIDNO.2的PCV1‑R、序列为SEQIDNO.5的PCV2‑R、序列为SEQIDNO.8的PCV3‑R、序列为SEQIDNO.11的