一种定量检测磺酰脲类药物的方法、探针及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115494235A(43)申请公布日2022.12.20(21)申请号202210903476.0(22)申请日2022.07.28(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山街五山路483号(72)发明人李向梅何子贤雷红涛刘志威沈兴黄日明(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102专利代理师李远星(51)Int.Cl.G01N33/558(2006.01)G01N33/532(2006.01)C08G83/00(2006.01)权利要求书2页说明书10页附图14页(54)发明名称一种定量检测磺酰脲类药物的方法、探针及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种定量检测磺酰脲类药物的方法、探针及其制备方法，在定量检测方法中，使用的探针包括结合的锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物和抗体，其中所述锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物中多巴胺壳层厚度为20～40nm。本发明通过匀速滴加配体的方式有效提高了材料的分散性和稳定性，与传统一锅法相比，合成材料的多分散系数从0.148降至0.024。聚多巴胺外壳涂层提供的醌基与抗体共价偶联，无需使用交联剂，使抗体偶联率比传统胶体金探针提升并突破90％。基于该探针建立的免疫层析方法对磺酰脲类药物的检测限为0.22‑4.27μg/kg，灵敏度是目前已报道免疫层析方法的145倍。本发明提供了操作简单、灵敏度高、可靠、可快速筛查保健品中磺酰脲类药物的检测手段。CN115494235ACN115494235A权利要求书1/2页1.一种定量检测磺酰脲类药物的方法，包括以下步骤：(A)样品前处理：称取样品置于离心管中，加入甲醇溶液，混匀，离心后获得上清液，将上清液稀释后待测；(B)标准曲线制作：按照步骤(A)处理方法，在已知无磺酰脲类药物的样品中配制含不同浓度磺酰脲类药物的甲醇溶液，提取稀释后得标准提取液；测试：将标准提取液加入酶标孔中，同时加入探针进行孵育，然后插入试纸条进行层析反应；每个浓度重复数遍，分别读取T、C线信号灰度值，添加浓度为0μg/kg时对应的T线与C线的灰度值之比为B0值，其他添标浓度对应的T线与C线的灰度值之比为Bx，以BX/B0为纵坐标，磺酰脲类药物添加浓度为横坐标，绘制标准曲线；(C)测试样品：将待测样品按照步骤(A)进行样品处理得到待测液提取液，然后按着步骤(B)的测试步骤进行检测获得相应的T线与C线的灰度值之比，然后根据标准曲线，计算出样品中磺酰脲类药物的总含量；其中，所述探针包括锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物和抗体，所述锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物中多巴胺壳层厚度为20～40nm。2.一种检测磺酰脲类药物的探针，其特征在于，其包括锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物和抗体，所述锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物中多巴胺壳层厚度为20～40nm。3.一种权利要求2所述的检测磺酰脲类药物的探针的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：(1)锆配位卟啉金属有机骨架的合成：称取八水氧氯化锆与苯甲酸溶于N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)中，混匀，制成混合液；称取内消旋‑四(4‑羧基苯基)卟啉(TCPP)溶解于N,N‑二甲基甲酰胺中并超声，直至深紫色混合液中没有肉眼可见的沉淀，制成配体液；将配体液滴加进混合液中，置于恒温磁力搅拌器中加热反应；反应结束后，等反应液自然冷却，离心收集球状晶体，洗涤，真空干燥，即得锆配位卟啉金属有机骨架；(2)锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物的合成：称取步骤(1)的锆配位卟啉金属有机骨架材料分散于乙醇溶液中并超声，然后加入Tris‑HCl缓冲液调节溶液pH，再添加盐酸多巴胺于混合液中，避光搅拌反应，然后离心收集固体，洗涤，最后用去离子水复溶并冷藏；(3)探针的合成：将步骤(2)复溶得到的溶液离心，去除上清液，加入硼酸盐缓冲溶液复溶，超声并混匀，再向液体中加入抗体，置于摇床孵育，使抗体与锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物充分结合；接着加入牛血清白蛋白溶液，用作封闭聚多巴胺涂层中多余的活性位点，并置于摇床孵育，最后离心，弃上清，将沉淀用磷酸盐缓冲溶液重悬，超声并混匀，制成探针，冷藏，备用。4.根据权利要求3所述的探针的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，锆配位卟啉金属有机骨架与盐酸多巴胺的质量比为2：(0.5～2.0)、Tris‑HCl溶液pH为7.0～8.5。5.根据权利要求3所述的探针的制备方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物溶液与抗体的体积比1000：(0.5～2.0)。6.根据权利要求3所述的探针的制备方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，所述恒温磁力搅拌器中加热反应为75～85℃条